产气荚膜梭菌感染的临床诊断和实验室检测

摘 要:

由于产气荚膜梭菌广泛存在于自然界,其毒素也可能存在于免疫过的或有自然抵抗力动物的肠道中。因此,临床上即使从肠道中检测到产气荚膜梭索菌的毒素,也不能确定是产气荚膜梭菌病。临床上应根据该病的流行病学特点、临床及病理变化特征做出初步诊断,确诊则要进行实验室检查,包括临床实验室诊断、毒素检测和分子生物学诊断等。

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由于产气荚膜梭菌Clostridium perfringens)广泛存在于自然界中,且其毒素也可能存在于免疫过的或有自然抵抗力动物的肠道中。因此,在临床上即使从肠道中检测到产气荚膜梭索菌的毒素,依然不能确定是产气荚膜梭菌病。产气荚膜梭菌病根据该病的流行病学特点、临床及病理变化特征可做出初步诊断,确诊则要进行实验室检查。

一、临床实验室诊断

产气荚膜梭菌病的正确确诊需根据以下几个方面:

1、小肠内检测出大量毒素;

2、肠道内有大量产气荚膜梭菌;

3、肾脏、肝脏等实质器官发现产气荚膜梭菌和其毒素;

4、尿液含有葡萄糖。

二、产气荚膜梭菌毒素检测

产气荚膜梭菌毒素检测的经典方法有:

1、动物致死性试验:将肠道内容物稀释取上清攻毒小白鼠,观察小白鼠致死情况;

2、毒素中和试验法:是更佳准确的方法,提取的毒素与毒素抗体中和后攻毒小白鼠,若对照组死亡,中和组不死亡,则精确表明某型毒素致死;

3、卵磷脂水解试验法:α毒素能分解卵磷脂,产气荚膜梭菌所有型均能产生α毒素,能验证产气荚膜梭菌的存在。

这些较为常用的方法中,以毒素中和试验最为特异,但相对而言这些方法均较费时费力,且敏感性较低。

三、分子生物学诊断方法

随着生物科学技术的快速发展,一些分子水平上的检测方法在毒素检测上得到了普遍应用。Kadra等为了验证PCR的准确可靠性,用PCR方法对不同来源的产气荚膜梭菌及毒素进行分型验证,将90株产气荚膜梭菌用细菌生化试验等方法进行验证,然后用小鼠血清中和试验进行定型,再用PCR法扩增α、β和ε三种毒素基因片段,最后将两种定型方法鉴定的血清型进行验证,结果表明,两种方法定型一致。表明PCR法准确可靠,且比小鼠的血清中和试验节约成本,方便可靠。于晓霞等为了寻找一种快速、准确的方法检测产气荚膜梭菌毒素型,采用SDS-PAGE的方法,对不同的产气荚膜梭菌分离株所产的外毒素蛋白进行分子量测定,从而确定所产外毒素的种类,确定菌株型。Fach等首先研究了用聚合酶链反应(PCR)方法检测毒素,参考毒素其他杆菌的磷脂酶C基因,设计了保守区域的针对基因特异性的引物,用PCR法扩增除了基因片段与毒素基因内的序列完全一致,表明可以使用PCR方法检测毒素基因,从而验证细菌型。Warren等应用PCR方法对包埋在福尔马林里的含有产气荚膜梭菌的病料进行基因检测,扩增到了α、β和ε毒素基因,虽然产气荚膜梭菌已经死亡,但产气荚膜梭菌基因依然没有被破坏,因而PCR方法可以检测死亡产气荚膜梭菌的存在。

参考文献:

1、Kadra B, Guillou JP, Popoff M, et al. Typing of sheep clinical isolates and identification of enterotoxigenic Clostridium perfringens strains by classical methods and by polymerase chain reaction (PCR). FEMS Immunology & Medical Microbiology, 1999, 24(3): 259-266.

2、Warren AL, Uzal FA, Blackall LL, et al. PCR detection of Clostridium perfringens type D in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of goats and sheep. Letters in applied microbiology, 1999, 29(1): 15-19.

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