卵黄琼脂培养基配制方法与检测产气荚膜梭菌的原理

摘 要:

卵黄琼脂培养基用于厌氧梭状芽孢杆菌的分离培养和卵磷脂酶试验。其主要成份有肉浸液、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、葡萄糖水溶液和50%卵黄盐水悬液。检测原理是基于将产气荚膜梭菌划线接种于卵黄琼脂平板厌氧培养后,由于细菌能产生卵磷脂酶,分解卵黄中的卵磷脂生成不溶性甘油酯形成乳白色混浊带,因此会在菌落周围及底部形成乳白色的混浊带。

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1卵黄琼脂培养基用途:

卵黄琼脂培养基(Egg yolk agar base)用于厌氧梭状芽孢杆菌的分离培养和卵磷脂酶试验。

2、培养基配制方法:

(1)基础培养基

肉浸液        1000mL

蛋白胨        15g

氯化钠        5g

琼脂         25~30g

pH7.5

(2)50%葡萄糖水溶液。

(3)50%卵黄盐水悬液。

制法:制备基础培养基,分装每瓶100mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂,冷至50℃,每瓶内加入50%葡萄糖水溶液2mL和50%卵黄盐水悬液10-15mL,摇匀,倾注平板。

350%卵黄盐水悬液配制方法

(1)买新鲜鸡蛋,用流水将蛋壳表面洗净,沥干;

(2)将洗净的鸡蛋放于70%乙醇中浸泡1h;

(3)以无菌操作取出蛋黄,加等体积无菌0.9%氯化钠溶液(生理盐水);

(4)混匀后置4°C贮存备用。

4、检测原理

蛋白胨和牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子;葡萄糖提供能源;氯化钠维持均衡的渗透压。将产气荚膜梭菌划线接种于卵黄琼脂平板上,厌氧培养后,由于产气荚膜梭菌产生卵磷脂酶,分解卵黄中的卵磷脂并生成不溶性甘油酯形成乳白色的混浊带,因此会在菌落周围及底部形成乳白色的混浊带。

卵黄琼脂培养基配制方法与检测产气荚膜梭菌的原理

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