负压动物饲养箱中进行动物采血及血清分离方法

摘 要:

采血工作由两名实验人员在负压动物饲养箱中进行。小鼠采血采用断尾或者摘眼球采血,豚鼠为心脏采血。采血后用棉球按住采血处止血。在负压饲养箱内将血液从注射器推入管口有棉球覆盖的1.5ml螺口离心管内,放入4℃冰箱使血清析出。将小型离心机放入生物安全柜内,离心分离血清。将装有血清的离心管放入65℃水浴加热40分钟,将血清中可能残留的病原菌灭活。未用的血清样品冻存于-70℃冰箱。

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(1)采血工作在负压动物饲养箱中进行。

(2)采血工作由两名实验人员完成。一名为采血人员,另一名为助手。

(3)小鼠采血采用断尾或者摘眼球放血的方法,为防止动物挣扎,需用提前乙醚进行麻醉。

(4)豚鼠采血为心脏采血,采血前用乙醚麻醉。采血后用棉球按住针头扎入部位,拔出注射器针头。注射器拔出后继续用棉球按住采血处止血。

(5)在负压饲养箱内将血液从注射器推入管口有棉球覆盖的1.5ml螺口离心管内。用过的棉花和注射器立即放入盛有6g/L的苯扎溴铵消毒剂的锐器收集容器内消毒,连同锐器收集容器一起与其它需要高压的物品一并装入生物安全包装袋内高压处理。

(6)拧紧离心管盖,用75%乙醇擦拭离心管表面。放入4℃冰箱使血清析出。

(7)打开二级生物安全柜,将小型离心机放入生物安全柜内,将装有血液的离心管,3000rpm,离心10分钟。

(8)用200µl移液器和吸头将离心后分离出的血清吸入预先准备好的新的1.5ml螺口离心管内。

(9)将装有血清的离心管放入65℃水浴加热40分钟,将血清中可能残留的病原菌灭活。

(10)将装有血清的离心管表面用75%乙醇擦拭,用双层生物安全包装袋包装,每层包装表面均用75%乙醇喷洒消毒。放入物流通道再经紫外线照射30分钟以上。将血清样品连同生物安全包装装入硬质密封包装内,双人运送至BSL-2实验室。

(11)在BSL-2实验室二级生物安全柜内再打开样品包装。慢慢打开离心管,管口朝向生物安全柜内侧。

(12)使用血清样品时,在二级生物安全柜中按规程进行操作。未用完的血清样品冻存于-70℃冰箱,双人双锁保管。

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