诺卡氏菌的染色方法和生化鉴定

摘 要:

诺卡氏菌革兰氏染色阳性,镜下观察到菌体呈分枝状或串珠状的细密如丝排列。革兰氏染色出现特征性的分枝状或串珠状,可作为识别诺卡氏菌的依据。临床样本涂片革兰氏染色能观察到典型的分枝形态,周围被急性炎症细胞所包裹,这是临床标本的典型特征。诺卡氏菌为抗酸性或弱抗酸菌、或在生长的某一阶段具有抗酸性,抗酸染色为弱阳性,若脱色时间延长,则抗酸染色为阴性,呈现蓝色。

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传统方法鉴定诺卡氏菌主要是依据染色特征,同时结合生化鉴定方法。

一、革兰氏染色

诺卡氏菌革兰氏染色阳性,镜下观察到菌体呈分枝状或串珠状的细密如丝排列,诺卡氏菌镜下形态与以色列放线菌相似,但菌丝末端不呈棍棒状膨胀,菌丝可缠绕成团,形成类似放线菌的颗粒。诺卡氏菌除了同分枝杆菌属的其他细菌一样含有结核硬脂酸(tuberculostearic acid)以外,它还含有短链(40-60个碳)的分枝菌酸(mycolicacid)。经革兰氏染色出现特征性的分枝状或串珠状,可作为识别诺卡氏菌的依据。临床样本,涂片经革兰氏染色能观察到典型的分枝形态,周围被急性炎症细胞所包裹,这是临床标本的典型特征。

二、抗酸染色

诺卡氏菌为抗酸性或弱抗酸菌、或在生长的某一阶段具有抗酸性,抗酸染色为弱阳性,若脱色时间延长,则抗酸染色为阴性,呈现蓝色。目前常用改良抗酸染色方法,改良抗酸染色与传统的抗酸染色相比,是用1%的硫酸作为脱色剂替代3%的盐酸乙醇。抗酸染色结果与培养诺卡氏菌的培养基类型及诺卡氏菌的培养时间均有关系。当菌丝断裂后,在显微镜下可呈现球状或杆状的菌丝断裂体。故而抗酸染色的结果仅能作为辅助性诊断,而不能作为最终的诊断依据。

三、生化鉴定

诺卡氏菌不分解腺嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、酪氨酸,不水解酪蛋白、产尿素酶,产β-内酰胺酶,枸橼酸盐、液化明胶、尿素分解实验均为阳性,不发酵葡萄糖和甘露醇,硝酸盐还原除鼻疽诺卡氏菌为阴性外,其他均为阳性。

生化鉴定的方法并不是一种可靠的方法,并非每次都得到期望的结果,对于近年来发现的特征菌群,比如新星诺卡氏菌等分类群不能进行鉴定。生化鉴定方法费时费力,并不能快速鉴定出诺卡氏菌,通常会对诊断诺卡氏菌造成延误。

参考文献:

张媛, 张媛媛, 李振军, 万康林. 诺卡氏菌研究进展. 中国人兽共患病学报. 2012,28(6):628-634.

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