负压手套箱中进行实验动物病理解剖方法

摘 要:

病理解剖在负压手套箱解剖柜中进行,病理解剖由3-4人进行。其中一名为解剖员,一名为助手,一名为记录员,一名为尸解监督员。具体解剖包括脾脏分离与检查、消化管的分离与检查、肝脏的分离与检查、肾脏分离与检查、气管和肺脏的分离与检查、鼻腔的检查、心脏的分离与检查、脑的分离与检查等。

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(1)病理解剖负压手套箱解剖柜中进行。

(2)病理解剖由三至四人进行。其中一名为解剖员,一名为助手,一名为记录员,一名为尸解监督员。解剖员负责主刀进行解剖;助手负责协助解剖;记录员负责记录组织分离检查的结果。尸解监督员对解剖员、助手及记录员的工作进行监督检查。

(3)在负压手套箱解剖柜台面铺上实验用单面吸水纸,吸水纸上放置解剖盘和其它所需实验用品。

(4)打开动物尸体包装,放入解剖盘中,用0.5%碘伏全身体表消毒。

(5)取出眼球放入10%中性福尔马林固定液。

(6)尸体仰卧在解剖盘上。分开前肢通过两腋下做一个深切口以便尸体平躺在解剖盘上。同样,分开后肢在内收肌和髋关节之间作一切口。

(7)尸体中线切口从下巴扩大到耻骨边缘,切割皮肤暴露下面的肌肉和筋膜。

(8)用中线切口切开腹部肌肉从胸骨延伸到耻骨联合处打开腹腔。用两个平行切口向左和右延伸直至近肋弓下缘。检查腹腔所有器官的位置是否移位或异位。

(9)脾脏分离与检查

①一手用镊子将脾脏提起,另一手持剪刀剪断韧带,分离脾。

②检查脾脏大小、硬度、边缘的厚度以及脾淋巴结的性状。

③检查脾脏的性状(肥厚、破裂等)和色泽。

④作切面检查,从脾头切至脾尾,切面要平整,检查脾髓的色泽,脾小梁的性状,并用刀背轻轻刮取脾髓,检查出血量的多少。

⑤剪下一块长宽高大约5mm的组织放入1.5ml离心管中用于制备组织匀浆液。剩余的组织固定于装有10%中性福尔马林的塑料密封桶中。

(10)消化管的分离与检查

①切断食管较低部位,直肠和肠系膜根部,游离消化管作进一步解剖。

②分离肠系膜,纵向打开肠管检查黏膜。从十二指肠、空肠、回肠和结肠各取3-5cm长的组织标本。这些标本应贴上标签固定于装有10%中性福尔马林的塑料密封桶中。观察肠内容物数量、性状,有无气体、血液、异物、寄生虫,肠黏膜皱壁有无增厚、水肿、充血、粘液量、溃疡、坏死、淋巴组织性状及有无炎症。发现异常必须由记录员记录在病理报告里。

③取出一个有代表性的肠系膜淋巴结固定于装有10%中性福尔马林的塑料密封桶中。

(11)肝脏的分离与检查

①用镊子夹住门静脉的根部,切断血管和韧带,取出肝脏。

②检查肝脏的大小、被膜的性状、边缘的厚薄、实质的硬度和色泽,以及肝淋巴结、血管、肝管等的性状。

③作切面,检查切面的出血量、色泽,肝小叶性状、有无脓肿、肝坏死等变化。

④剪下一块长宽高大约5mm的组织放入1.5ml离心管中用于制备组织匀浆液。剩余的组织固定于装有10%中性福尔马林的塑料密封桶中。

(12)肾脏分离与检查

①用镊子剥离肾脏周围组织,然后将肾脏采出。

②检查肾脏大小、硬度、被膜是否容易剥离,肾表面的色泽、平滑度,有无疤痕、出血变化。

③检查切面皮质和髓质的色泽,有无瘀血、出血、化脓和梗死。注意观察皮质和髓质交界处的切面是否隆突,以及肾盂、输尿管、肾淋巴结的性状等。

④剪下一块长宽高大约5mm的组织放入1.5ml离心管中用于制备组织匀浆液。剩余的组织固定于装有10%中性福尔马林的塑料密封桶中。

(13)剪除肋骨排表面的肌肉,用骨镊切断胸腔左右两面的肋骨,摘除胸骨暴露胸腔,在原位检查胸内容物和脏器。检查胸腔液的数量和性状,胸膜的色泽,有无出血、充血或粘连。

(14)一只手托起气管和食管向后解剖,从纵隔向下切口,游离胸腔脏器,在横膈膜水平切断胸主动脉。取出胸腔脏器作进一步解剖。

(15)取下胸腺,检查后固定于装有10%中性福尔马林的塑料密封桶中。

(16)气管和肺脏的分离与检查

①用镊子夹住气管向上提起,剪断肺脏与胸膜的连结韧带,然后将气管和肺脏一并取出。

②检查肺脏的大小、肺胸膜的色泽以及有无出血和炎性渗出物等。

③检查有无硬块、结节和气肿。

④剪开气管和支气管,检查粘膜性状,有无出血和渗出物等。在气管中段取下约3cm长的标本放入装有10%中性福尔马林的塑料密封桶中。

⑤检查左右肺叶横切面的色泽和血液数量,有无炎性病变等。

⑥在左右肺叶各剪下一块长宽高大约5mm的组织放入1.5ml离心管中用于制备组织匀浆液。剩余的左右肺叶固定于装有10%中性福尔马林的塑料密封桶中。

(17)鼻腔的检查

检查鼻腔和鼻中隔黏膜的色泽、有无出血、炎性水肿、结节、糜烂、溃疡穿孔及疤痕等。

(18)心脏的分离与检查

①在心包左侧中央作十字切口剪开心包膜,暴露心脏,注意心包的光泽度及心包内液体的情况,心脏的大小、外形、心外膜有无出血和炎性渗出物。

②切断大的脉管离析心脏,用镊子夹住心尖,提出心脏。

③检查心脏纵沟,冠状沟的脂肪量和性状。

④自下腔静脉入口处至右心房作直线剖开,从此直线中点沿心脏右缘剖至心尖部,从距离心尖部与心室间隔右侧1cm处平行地剖至肺动脉;检查右心房、右心室、三尖瓣、肺动脉瓣、腱索有否病变。

⑤自左右静脉入口处将左心房直线切开,沿心脏左缘剖至心尖部,再从距离心尖部与心室间隔左侧1cm处平行地剖开左心室的前壁和主动脉,检查二尖瓣、主动脉瓣、腱索有无病变,左心房、左心室内壁有无出血和感染。

⑥自冠状动脉口起剪开前降支和旋支,在主动脉根部右侧,于右心室的外膜找到右冠状动脉主干,先横切一刀,再剪至后降支;观察有无粥样硬化和血栓等。

⑦切除主动脉弓的一部分,长为2-3cm,固定于装有10%中性福尔马林的塑料密封桶中。

(19)脑的分离与检查

①在寰骨与枕骨交接处横切颈部分离头颅。把头固定在解剖钳里。

②从颅盖骨剥离皮肤和颞肌。

③用医用骨科电锯做圆形切口切除颅盖骨延伸到寰骨与枕骨交接处。使用电锯时同时使用防护罩罩住电锯与头颅,以阻隔出现的骨沫。负责固定的手需戴上防割手套。

④掀掉颅盖骨,暴露下面的脑和脑膜。用剪刀沿锯开的颅骨剪断硬脑膜,并掀起在中线处反折,暴露脑。

⑤握住头,鼻尖向上,在脑和颅底之间插入手术刀。切断颅神经和脑干,取出脑组织。

⑥检查软脑膜、硬脑膜血管充盈情况,脑回之间的脑沟中液体的数量与色泽,脑表面凸起或凹下的地方是否明显。用刀将脑做一水平切面,保留胼胝体,暴露侧脑室,注意检查尾状核有无出血、软化灶。侧脑室内容物数量、性质,然后将脑做多处切面,检查有无变化。

⑦剪下一块长宽高大约5mm的组织放入1.5ml离心管中用于制备组织匀浆液。剩余的组织固定于装有10%中性福尔马林的塑料密封桶中。

(20)完成解剖,解剖员必须检查所有组织是否放在适当的装有10%中性福尔马林的塑料密封桶内,以及各离心管内组织正确。记录员在病理报告上记录相应的组织,并对所取得的所有组织进行核查。

(21)器官称重:解剖后的组织应迅速将脏器称重,以免水分蒸发造成差异。同时称量含有组织的离心管重量,根据预先称量的空离心管重量,由记录员计算用于组织匀浆的组织块的重量。

(22)用于组织匀浆的组织块装在1.5ml离心管中,离心管表面经75%乙醇擦拭消毒后由双层生物安全包装袋包装,每层表面用75%乙醇喷洒消毒。再用硬质密封盒包装后转运至二级生物安全柜进行组织病毒液制备,组织病毒液制备规程参见“猕猴组织病毒液制备”。

(23)由10%中性福尔马林固定的组织用于组织病理分析。对盛装组织和固定液的密封塑料桶表面用3%有效氯的含氯消毒液擦拭消毒。经双层生物安全包装袋包装,每层表面用75%乙醇喷洒消毒,置于ABSL-3实验室物流间紫外灯照射30分钟以上,放置7天后将固定的组织标本连同生物安全包装一并装入硬质密封箱中,由双人用手推车运送至BSL-2条件的病理实验室。

(24)在二级生物安全柜内打开外层生物安全包装袋,用75%乙醇对密封塑料桶表面擦拭消毒,取出装有固定组织的密封桶,避光保存于室温环境。

(25)固定后的组织按病理实验室规程进行组织病理分析。

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