结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验操作方法与结果判定

摘 要:

本实验方法和结果判定摘自《GB/T 18645-2002 动物结核病诊断技术》,包括牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验和禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验。

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一、试验器材

游标卡尺、剪刀、注射器、针头、消毒盘、酒精棉等。

二、牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

1、牛的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验(出生后20d的牛即可用本试验进行检疫)。

(1)操作方法

a)注射部位及术前处理:将牛只编号后在颈侧中部上三分之一处剪毛(或提前一天剃毛),三个月以内的犊牛,也可在肩胛部进行,直径约10cm。用卡尺测量术部中央皮皱厚度,作好记录。注意术部应无明显的病变。

b)注射剂量:不论大小牛只,一律皮内注射0.1mL(含2000IU)。即将牛型结核分枝杆菌PPD稀释成每毫升含2万IU后,皮内注射0.1mL。冻干PPD稀释后当天用完。

c)注射方法:先以75%酒精消毒术部,然后皮内注射定量的牛型结核分枝杆菌PPD,注射后局部应出现小疱,如对注射有疑问时,应另选15cm以外的部位或对侧重作。

结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验操作方法与结果判定

d)注射次数和观察反应:皮内注射后经72h判定,仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应,并以卡尺测量皮皱厚度,作好详细记录。对疑似反应牛应立即在另一侧以同一批PPD同一剂量进行第二回皮内注射,再经72h观察反应结果。

结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验操作方法与结果判定

对阴性牛和疑似反应牛,于注射后96h和120h再分别观察一次,以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。

(2)结果判定

a)阳性反应:局部有明显的炎性反应,皮厚差大于或等于4.0mm。

b)疑似反应:局部炎性反应不明显,皮厚差大于或等于2.0mm小于4.0mm。

c)阴性反应:无炎性反应。皮厚差在2.0mm以下。

凡判定为疑似反应的牛只,于第一次检疫60d后进行复检,其结果仍为疑似反应时,经60d再复检,如仍为疑似反应,应判为阳性。

2、其他动物牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

参照牛的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验进行。

三、禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验是最广泛使用于家禽的试验。牛及其他哺乳动物也可用牛型结核分枝杆菌PPD和禽型结核分枝杆菌PPD同时在不同的部位进行,以区分特异性和非特异性变态反应。

1、禽的禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

(1)操作方法

用10mm×0.5mm针头肉垂皮内注射0.1mL(0.25万IU)禽型结核分枝杆菌PPD,48h后观察结果。

(2)结果判定

阳性反应为接种部位肿胀,从5.0mm直径的小硬结到扩展至其他肉垂与颈部的广泛性水肿。火鸡肉垂的结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验,没有家禽的试验那样可靠。其他禽类也可用翼蹼作试验,但结果一般不理想。水禽可接种脚蹼,但试验不敏感并经常与接种部位的感染相混淆。

2、牛的禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

(1)操作方法

与牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验相同,只是禽型结核分枝杆菌PPD的剂量为每头0.1mL(含0.25万IU)。即将禽型结核分枝杆菌PPD稀释成每毫升含2.5万IU后,皮内注射0.1mL。

(2)结果判定

  1. a) 对牛型结核分枝杆菌PPD的反应为阳性(局部有明显的炎性反应,皮厚差大于或等于0mm),并且对牛型结核分枝杆菌PPD的反应大于对禽型结核分枝杆菌PPD的反应,二者皮差在2.0mm以上判为牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性。

对已经定性为牛型结核分枝杆菌感染的牛群。其中即使少数牛的皮差在2.0mm以下,甚至对牛型结核分枝杆菌PPD的反应略小于对禽型结核分枝杆菌PPD的反应(反应差小于或等于2.0mm),只要对牛型结核分枝杆菌PPD的反应在2.0mm以上,也应判定为牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性牛。

b)对禽结核分枝杆菌PPD的反应大于对牛型结核分枝杆菌PPD的反应,两者的皮差在2.0mm以下,判为禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性。

对已经定性为副结核分枝杆菌或禽型结核分枝杆菌感染的牛群。其中即使少数牛的皮差在2.0mm以下,甚至对禽型结核分枝杆菌PPD的反应略小于对牛型结核分枝杆菌PPD的反应(不超过2.0mm),只要对禽型结核分枝杆菌PPD的反应在2.0mm以上,也应判为禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性牛。

参考依据:

GB/T 18645-2002 动物结核病诊断技术

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