动物结核病诊断技术(GB/T 18645-2002)——附录C:培养基配制方法

摘 要:

本附录是标准的附录,摘自动物结核病诊断技术(GB/T 18645-2002),主要介绍了几种结核分枝杆菌培养基的成分和配制方法,包括:配氏(Petragnane)培养基、L-J(Lowenstein-Jensen)培养基、青霉素血液琼脂培养基和噻吩-2酸肼(T2H )培养基。

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C1 配氏(Petragnane)培养基

C1.1 成分

新鲜脱脂牛奶450ml,马铃薯淀粉18g,天门冬素(或蛋白胨2.6g,去皮马铃薯225g,鸡蛋15个(除去3个蛋清),甘油40g,2%孔雀绿水溶液30ml。

C1.2 制法

将马铃薯去皮擦成丝,加入马铃薯淀粉、天门冬素(或蛋白胨)、脱脂牛奶置烧杯中水浴煮沸40min-60min,并不时搅拌均匀,使成糊状。待冷却至50°C时加入打碎的鸡蛋(蛋壳先用75%酒精消毒洗净),混匀后用四层纱布过滤除渣。最后加入甘油和孔雀绿水溶液搅拌均匀,分装于灭菌的试管中。

将分装培养基的试管置血清凝固器(或流通蒸汽锅)内,间歇灭菌3次,每天一次,第一天65°C灭菌30min,第二、三只天75-80°C灭菌30min。

C1.3 用途

分离培养结核分枝杆菌用。

C2 L-JLowenstein-Jensen)培养基

C2.1 成分

无水磷酸二氢钾(KH2PO4) 2.4g,硫酸镁(MgSO4.H2O) 0.24g,构椽酸镁0.6g,DL-天门冬素(DL-Asparagin) 3.6g,甘油12g,蒸馏水600 mL,马铃薯粉30g,鸡蛋(约30个) 1000 mL, 2%孔雀绿水溶液20mL。

C2.2 制法

将磷酸二氢钾、硫酸镁、拘椽酸镁、甘油和蒸馏水混合,加热使溶解。取马铃薯粉加入上述溶液内,随加随搅拌,水浴煮沸1h。鸡蛋用75%酒精消毒外壳后,打开,将蛋清和蛋黄充分搅匀,4层纱布过滤。待上述加马铃薯粉的盐溶液冷却至50°C时,加人鸡蛋液和孔雀绿,并充分搅匀。

分装,80°C灭菌30 mi后,37°C培养48h,若无杂菌污染即可使用。

C2.3 用途

供培养结核分枝杆菌用。

C3 青霉素血液琼脂培养基

C3.1 成分

琼脂1.5g,中性甘油1mL,蒸馏水74mL,兔全血(或牛全血)25mL,青霉素(2000 IU /mL) 1.85mL。

C3.2 制法

将琼脂、中性甘油及蒸馏水混合,经103.4kPa灭菌15 min。 待冷却到50°C时加入兔全血(或牛全血)与青霉素,混合后分装,经37°C培养48h,无杂菌污染即可使用。

C3.3 用途

供培养结核分枝杆菌用。

C4 噻吩-2酸肼(T2H )培养基

C4.1 成分

L-J培养基,T2H。

C4.2 制法

取 L-J培养基(见C2)100mL,水浴煮沸,加T2H 1mg,充分搅匀。分装,80°C灭菌30min 后,37°C培养48h ,若无杂菌污染即可使用。

C4.3 用途

供结核分枝杆菌生化鉴定用。

本附录摘自国标——《动物结核病诊断技术(GB/T 18645-2002)

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