动物结核病诊断技术(GB/T 18645-2002)——附录A:标本消化浓缩法

摘 要:

本附录是标准的附录,摘自动物结核病诊断技术(GB/T 18645-2002),主要介绍了痰液或乳汁等样品的几种消化浓缩方法,可使检验标本中蛋白质溶解、杀灭污染杂菌,而结核分枝杆菌因有蜡质外膜而不死亡,并得到浓缩。

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痰液或乳汁等样品,由于含菌量较少,如直接涂片镜检往往是阴性结果。此外,在培养或作动物试验时,常因污染杂菌生长较快,使病原结核分枝杆菌被抑制。下列几种消化浓缩方法可使检验标本中蛋白质溶解、杀灭污染杂菌,而结核分枝杆菌因有蜡质外膜而不死亡,并得到浓缩。

A 1 硫酸消化法

用 4%-6%硫酸溶液将痰、尿、粪或病灶组织等按1:5之比例加入混合,然后置37°C,作用1-2 h。经3000-4000 r/min离心30 min,弃上清,取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。也可用硫酸消化浓缩后,在沉淀物中加入3%氢氧化钠中和,然后抹片镜检、培养和接种动物。

A 2 氢氧化钠消化法

取氢氧化钠35-40g,钾明矶2g,嗅麝香草酚蓝20mg(预先用60%酒精配制成0.4%浓度,应用时按比例加入),蒸馏水1000 mL混合,即为氢氧化钠消化液。

将被检的痰、尿、粪便或病灶组织按1:5的比例加入氢氧化钠消化液中,混匀后,37°C作用2-3 h,然后无菌滴加5%-10%盐酸溶液进行中和,使标本的pH 调到6.8左右(此时显淡黄绿色),以3000-4000 r/min离心15-20 min,弃上清,取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。

在病料中加入等量的4%氢氧化钠溶液,充分摇荡5-10 min,然后用3000 r/min离心15-20 min,弃上清,加1滴酚红指示剂于沉淀物中,用2 mol/L盐酸中和至淡红色,然后取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。

在痰液或小脓块中加入等量的1%氢氧化钠溶液,充分振摇15 min,然后用3000 r/min离心30 min,取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。

对痰液的消化浓缩也可采用以下较温和的处理方法:取1mol/L (或4% )氢氧化钠水溶液50 mL,0.1mol/L柠檬酸钠50 mL,N-乙酞-L-半胧氨酸0.5g,混合。取痰一份,加上述溶液2份,作用24-48 h,以3000 r/min离心15min,取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。

A3 安替福民(antiformin )沉淀浓缩法

溶液A:碳酸钠12g,漂白粉8g,蒸馏水80mL。

溶液B:氢氧化钠15g,蒸馏水85mL。

应用时A 、B两液等量混合,再用蒸馏水稀释成15% - 20%后使用,该溶液须存放于棕色瓶内。

将被检样品置于试管中,加入3-4倍量的15% - 20%安替福民溶液,充分摇匀后37°C作用1 h,加1-2倍量的灭菌蒸馏水,摇匀,3000 - 4000 r/min离心20 - 30 min,弃上清沉淀物加蒸馏水恢复原量后再离心一次,取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。

本附录摘自国标——《动物结核病诊断技术(GB/T 18645-2002)

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