牛型和禽型结核分枝杆菌的结核菌素(PPD)皮内变态反应试验

摘 要:

结核菌素是结核杆菌的菌体成分,PPD是其中纯蛋白衍生物(purified protein derivative)。可用结核分枝杆菌PPD的皮内变态反应试验检查动物结核病。牛及其他哺乳动物可用牛型结核分枝杆菌PPD和禽型结核分枝杆菌PPD同时在不同的部位进行,以区分特异性和非特异性变态反应。本文根据《动物结核病诊断技术(GB/T 18645-2002)》介绍了PPD皮内变态反应试验的操作方法和结果判定。

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结核菌素是结核杆菌的菌体成分,其中纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)是由塞伯尔(Seibert)首先制备的。结核菌素皮肤反应是迟发型细胞超敏反应。它是抗原(结核杆菌或卡介苗)进入机体使机体的免疫T淋巴细胞致敏,并大量分化增殖。当已致敏的机体再次遭受到抗原入侵时,致敏淋巴细胞就会与之结合,引起变态反应性炎症。表现在结核菌素注射部位形成硬结甚至发生水泡、坏死。结素试验阳性表明机体曾经受到结核菌感染或接种过卡介苗。

一、牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

结核分枝杆菌PPD进行的皮内变态反应试验对检查活畜结核病是很有用的。该试验用牛型结核分枝杆菌PPD进行。

1、牛的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

出生后20d的牛即可用本试验进行检疫。

(1)操作方法

a) 注射部位及术前处理:将牛只编号后在颈侧中部上三分之一处剪毛(或提前一天剃毛),三个月以内的犊牛,也可在肩肿部进行,直径约10cm。用卡尺测量术部中央皮皱厚度,作好记录。注意,术部应无明显的病变。

b) 注射剂量:不论大小牛只,一律皮内注射1mL(含2000IU)。即将牛型结核分枝杆菌PPD稀释成每毫升含2万IU后,皮内注射0.1mL。冻干PPD稀释后当天用完。

c) 注射方法:先以75%酒精消毒术部,然后皮内注射定量的牛型结核分枝杆菌PPD,注射后局部应出现小疱,如对注射有疑问时,应另选15cm以外的部位或对侧重作。

牛型和禽型结核分枝杆菌的结核菌素(PPD)皮内变态反应试验

d) 注射次数和观察反应:皮内注射后经72h判定,仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应,并以卡尺测量皮皱厚度,作好详细记录。对疑似反应牛应立即在另一侧以同一批PPD同一剂量进行第二回皮内注射,再经72h观察反应结果。

牛型和禽型结核分枝杆菌的结核菌素(PPD)皮内变态反应试验

对阴性牛和疑似反应牛,于注射后96h和120h再分别观察一次,以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。

(2)结果判定

a) 阳性反应:局部有明显的炎性反应,皮厚差大于或等于0mm。

b) 疑似反应:局部炎性反应不明显,皮厚差大于或等于0mm、小于4.0mm。

c) 阴性反应:无炎性反应。皮厚差在0mm以下。

凡判定为疑似反应的牛只,于第一次检疫60d后进行复检,其结果仍为疑似反应时,经60d再复检。如仍为疑似反应,应判为阳性。

2、其他动物牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

参照牛的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验进行。

二、禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验是最广泛使用于家禽的试验。牛及其他哺乳动物也可用牛型结核分枝杆菌PPD和禽型结核分枝杆菌PPD同时在不同的部位进行,以区分特异性和非特异性变态反应。

1、禽的禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

(1)操作方法

用10mm×0.5mm针头肉垂皮内注射0.1mL(0.25万IU)禽型结核分枝杆菌PPD,48h后观察结果。

(2)结果判定

阳性反应为接种部位肿胀,从5.0mm直径的小硬结到扩展至其他肉垂与颈部的广泛性水肿。火鸡肉垂的结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验,没有家禽的试验那样可靠。其他禽类也可用翼蹼作试验,但结果一般不理想。水禽可接种脚蹼,但试验不敏感并经常与接种部位的感染相混淆。

2、牛的禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

(1)操作方法

与牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验相同,只是禽型结核分枝杆菌PPD的剂量为每头0.1mL。

(2)结果判定

a) 对牛型结核分枝杆菌PPD的反应为阳性(局部有明显的炎性反应,皮厚差大于或等于0 mm ),并且对牛型结核分枝杆菌PPD的反应大于对禽型结核分枝杆菌PPD的反应,二者皮差在2.0 mm以上,判为牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性。

对已经定性为牛型结核分枝杆菌感染的牛群。其中即使少数牛的皮差在2.0 mm以下,甚至对牛型结核分枝杆菌PPD的反应略小于对禽型结核分枝杆菌PPD的反应(反应差小于或等于2.0 mm ) ,只要对牛型结核分枝杆菌PPD的反应在2.0 mm以上,也应判定为牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性牛。

b) 对禽刮结核分枝杆菌PPD的反应大于对牛型结核分枝杆菌PPD的反应,两者的皮差在0 mm以上,判为禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性。

本方法摘自国标——《动物结核病诊断技术(GB/T 18645-2002)

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  • 动物结核病诊断技术(GB/T 18645-2002)——附录A:标本消化浓缩法 – 细菌之家
  • 动物结核病诊断技术(GB/T 18645-2002)——附录B:萋-尼氏抗酸染色液配制方法 – 细菌之家

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