链霉亲和素(streptavidin,SA)的性质及其与亲和素的异同

摘 要:

链霉亲和素是链霉菌分泌的一种蛋白质,分子量为65kDa,等电点6.0。链霉亲和素是四聚体蛋白,一分子链霉亲和素可结合四分子生物素。链霉亲和素与生物素之间的亲和力极强,是一种非常完美的生物素结合蛋白,链霉亲和素的适用范围也比亲和素更为广泛。目前链霉亲和素相关产品主要包括标记化链霉亲和素、链霉亲和素酶标板、链霉亲和素磁珠等。

关键词: , ,

一、链霉亲和素性质

链霉亲和素(streptavidin,SA)是从链霉菌streptomyces avidinii培养物中提取的一种分泌性蛋白质,分子量为65kDa,等电点6.0。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成,其氨基酸组成中,甘氨酸和丙氨酸的含量较大,而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基;链霉亲和素是一种稍偏酸性(pH6.0)的蛋白质,不带任何糖基。

链霉亲和素的活性单位是以结合1μg生物素所需的量来表示,1mg链霉亲和素的最高活性可达18U。

链霉亲和素是四聚体蛋白,一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合。链霉亲和素与生物素之间的亲和力极为强烈,亲和常数(K)为1015mol/L。链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于10mol/L数量级。因此链霉亲和素是一种非常完美的生物素结合蛋白,链霉亲和素的适用范围也比亲和素更为广泛。

二、链霉亲和素与亲和素的比较

1、相同点

(1)与生物素的结合能力:亲和素(AV)为13-15U,链霉亲和素(SA)为14-18U。

(2)活性中心依赖于色氨酸-赖氨酸:亲和素在氨基酸序列的70-71和110-111两个位点有色氨酸-赖氨酸,链霉亲和素在氨基酸序列的79-80和120-121两个位点含有色氨酸-赖氨酸。

 2、不同点

(1)分子量:亲和素为68KDa,链霉亲和素为65KDa。

(2)等电点:亲和素为10.5,链霉亲和素为6.0。亲和素带正电较多,非特异性结合较强。

(3)位阻效应:链霉亲和素的生物素结合位点较亲和素深,位阻效应较强,长臂生物素更适合。

(4)生物素的结合:亲和素随机结合,链霉亲和素协同结合。

(5)蛋白质结构:亲和素含二硫键和10%糖,链霉亲和素含甘氨酸丙氨酸较多,无糖和二硫键。

三、链霉亲和素相关产品

1、标记化链霉亲和素

用酶或荧光素等修饰链霉亲和素,应用于ELISA放大检测信号,提高检测灵敏度。

(1)异硫氰酸荧光素(FITC)标记链霉亲和素

荧光素是目前广泛用于免疫病理、细胞化学、流氏细胞、病理等方面的免疫标记试剂。将异硫氰酸荧光素(FITC)共价交联到链霉亲和素分子的氨基基团上,经过纯化、蛋白定量、FITC浓度及效价鉴定制备而成。

(2)辣根过氧化物酶标记链霉亲和素

2、链霉亲和素酶标板

将链霉亲和素直接或间接预包被在酶标板上,稳定性高,易于保存,使用时只要加入生物素化的抗体或者抗原即可。

3、链霉亲和素磁珠

链霉亲和素磁珠由磁微粒与高纯度链霉亲和素共价结合而成。磁珠可用于捕获生物素标记的底物,包括生物素标记的抗原、抗体和核酸。生物素-链霉亲和素的相互作用很强,非特异性结合率很低,使得被捕获的底物可满足后续实验要求。

    A+

除注明外,本站内容由 细菌之家 原创或整理,转载请注明出处及链接。

本文永久链接: http://www.bacteria.cn/html/2016/1781.html

  • 请您留言:专业水平所限,谬误之处在所难免。如您发现不正之处,请在下面留言,谢谢!

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen:

图片 表情