噬菌体基因组DNA的提取方法

摘 要:

提取噬菌体基因组的方法有多种,下面是按照Ando文章中的方法整理的噬菌体基因组提取方法,实验的时候可以参考。

关键词: ,

1、按0.1-0.01的感染复数(MOI)将噬菌体接种到200ml对数生长期的菌液,培养至菌液变澄清。

2、按1%的比例(v/v)加入氯仿,37°C振荡30min,裂解菌体。

3、裂解后的菌液于8000g离心5min,然后用0.22μm孔径滤膜过滤。

4、滤液中加入216μl缓冲液L1(20mg/ml RNase A,6mg/ml DNase I,0.2mg/mL BSA,10mM EDTA,100 mM Tris-HCl和300 mM NaCl,pH 7.5),在37°C轻轻振荡1小时。

5、然后加入30ml冰冷的缓冲液L2(30%聚乙二醇(PEG)6000,3M NaCl),4°C放置过夜。

6、4°C 10000g离心30分钟。

7、弃上清,沉淀用用9ml缓冲液L3(100mM Tris-HCl,100mM NaCl,25mM EDTA,pH7.5)重悬。

8、然后加入9ml缓冲液L4(4% SDS),70°C孵育20min。

9、冰浴冷却后,加入9ml缓冲液L5(2.55 M醋酸钾,pH 4.8),4°C 10000g离心30min。

10、上清液用核酸提取纯化试剂盒(如QIAGEN-tip 100)提取噬菌体基因组DNA。

参考文献:

Ando H, et al. Engineering Modular Viral Scaffolds for Targeted Bacterial Population Editing. Cell Systems 2015,1(3): 187-196.

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