细菌抹片(涂片、触片)的制备及固定方法

摘 要:

染色是细菌学的基本技术。通过染色使细菌着色,与背景形成鲜明的对比,在显微镜下能较清楚地显示其形态和结构。制作细菌抹片的载玻片应清晰透明、清洁无油渍,滴上水后能均匀展开,附着性好。根据涂片所用的材料不同,如菌液、菌落、组织等,其抹片方法也有差异。涂片后在室温中自然干燥,火焰固定或化学固定后即可染色。

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细菌染色是细菌学的一个重要而基本的技术。由于细菌个体微小,无色且半透明,直接在普通光学显微镜下观察,往往不易识别,只能大致见到其外形。因此,借助于染色法可使细菌着色,与背景形成鲜明的对比,便于在显微镜下进行观察,能较清楚地显示其形态和结构。此外,由于细菌细胞的结构和化学成分不同而呈现出不同的染色反应,可以作为鉴别细菌的一种依据。

一、载玻片的处理

载玻片应清晰透明、清洁而无油渍,滴上水后能均匀展开,附着性好,如有残余油渍,可按下列方法处理。

1、滴上95%酒精2-3滴,用清洁纱布擦拭,然后在酒精灯外焰上轻轻拖过几次。

2、若上法仍未能除去油渍,可再滴上1-2滴冰醋酸,用纱布擦净,再在酒精灯火外焰上轻轻拖过。

玻片洁净后,用玻璃铅笔在预涂材料处的背面划一个直径1.5cm的圆圈,用以标记。

二、涂片方法

根据涂片所用的材料不同,抹片方法也有差异。

1、菌落等非液体材料涂片方法

对于菌落、脓、粪便等非液体材料,涂片时,左手握菌种管,右手持接种环(又称铂金耳),取1-2环生理盐水,置于玻片上,然后将接种环在火焰上灭菌,待冷后,钓取少许菌落、脓或粪便等材料,置于生理盐水中混匀,涂成直径约1.5cm的涂膜,此膜既薄又均匀为好,待干即可。

2、液体(菌液)材料涂片法

如细菌液体培养物、血清、组织渗出液、乳汁等,可直接用灭菌接种环取1-2环材料,均匀涂抹在载玻片上,使成直径为1.5cm左右圆形或椭圆形涂膜,自然干燥后备用。

3、血液涂片方法

先取一张干净无油垢边缘整齐的载玻片,其一端沾取少许血液,以45度角放在另一张干净无油垢的载玻片一端,从这端向另一端推成薄而均匀的血膜,待干后备用。

4、组织脏器涂片方法

先用镊子夹持组织中部,然后以灭菌剪刀剪取一小块组织,用镊子夹出后,以组织块新鲜切面在载玻片上压印(触片)或涂成一薄层,待干后备用。

三、干燥

涂片最好在室温中自然干燥。必要时,可将标本面向上,在离酒精灯火焰远处烘干,切勿紧靠火焰,以免标本糊焦而不能检查。

四、固定

有两种固定方法:

1、火焰固定

将已干燥好的抹片,使涂面向上,以其背面在酒精灯外焰上如钟摆样来回拖过数次,略作加热(但不能太热,以不烫手为度)进行固定。放置冷却后,进行染色。

2、化学固定

血液、组织、脏器等抹片作吉姆萨染色或单染色时,不用火焰固定而用甲醇固定,可将已干燥的抹片浸入甲醇中2-3分钟,取出晾干;或在抹片上滴加数滴甲醇,使其作用2-3分钟后,自然挥发干燥,抹片作瑞氏染色时则不必作特别固定,染色液中含有甲醇可以达到固定的目的。

抹片固定的目的是:

1、使菌体蛋白凝固附着在载玻片上,以防染色过程中被水冲掉。

2、改变细菌对染料的通透性,因活细菌一般不允许染料进入细菌体内。

3、能杀死抹片中的部分微生物

必须注意的是,在抹片固定过程中,实际上并不能保证杀死所有细菌,也不能完全避免在染色水洗时不将部分涂抹物冲掉。因此,在制备烈性病原菌,特别是带芽胞的病原菌抹片和染色时,就严格处理染色用过的残液和抹片本身,以免引起病原的扩散。

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