台盼蓝染色法鉴定细胞活力

摘 要:

台盼蓝(trypan blue)是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性或检测细胞的活力。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色细胞时,时间不宜过长,否则部分活细胞也会着色,会干扰计数。

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台盼蓝(trypan blue)是一种细胞活性染料,是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一,常用于检测细胞膜的完整性或检测细胞的活力。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,操作非常简单。

一、染色原理

正常的活细胞,胞膜结构完整,能够阻止台盼蓝,使之不能够进入胞内,细胞不被台盼蓝染色;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,台盼蓝染料可穿透细胞膜,进入细胞,与解体的DNA 结合,使其着色,从而细胞变蓝。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

二、染液配制

4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。使用时,用PBS稀释至0.4%(相当于再10倍稀释)。

三、染色方法

制备单细胞悬液,并作适当稀释(106细胞/ml),取9mL细胞悬液移入试管中,加1mL 0.4%台盼蓝溶液,混匀。

四、结果观察

计数:在3分钟内,用计数板分别计数活细胞和死细胞。

显微镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。

根据下式计算细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%。

五、注意事项

台盼蓝染细胞时,时间不宜过长,否则部分活细胞也会着色,会干扰计数。台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况,染色后在显微镜下观察即可,活细胞不被染色。

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