幽门螺杆菌的生长、生存和培养条件

摘 要:

幽门螺杆菌是专性微需氧菌,稳定生长需要含2-8%的O2,在大气和绝对厌氧条件下均不能生长。从临床标本中分离野生株都必需补充适量的CO2。幽门螺杆菌生长缓慢,通常需要3-5d或更长时间才能形成针尖状小菌落。许多固体培养基能用作分离培养幽门螺杆菌的基础培养基,但必需加入适量的全血或胎牛血清。最适培养条件为37°C和pH7.0-7.2。

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幽门螺杆菌Helicobacter pyloriHp)是一种专性微需氧菌。它的稳定生长需要依靠在生长的微环境中含2-8%的O2。因此,它在大气中和绝对厌氧条件下均不能生长。从临床标本中分离野生株都必需补充适量的CO2

许多固体培养基能用作分离培养幽门螺杆菌的基础培养基。例如:脑心浸液琼脂、哥伦比亚琼脂、布氏琼脂和M-H琼脂等。但必需加入适量的全血(马、羊或人)或胎牛血清作为补充物。加入适量的活性炭(0.2%)或淀粉(1%)亦有利于吸收培养基中衍化产生的毒性氧离子。

幽门螺杆菌的生长、生存和培养条件

幽门螺杆菌生长缓慢,通常需要3-5d,甚至更长时间,才能形成针尖状小菌落。为了避免快速生长的兼性厌O2菌和霉菌等的过度生长,常需加入由万古霉素、TMP、两性霉素、多粘菌素等组合的抑菌剂。幽门螺杆菌在液体培养基中生长更加困难。这可能与在液体里面更难保证菌体周围稳定的微含O2量环境有关。

在血琼脂中,幽门螺杆菌不能在含有5%胆汁的情况下生长。将细菌暴露于含有5%胆汁的液体培养基中30min,有25%的幽门螺杆菌被杀死。这说明幽门螺杆菌通过十二指肠时尚有生存的可能性。

有报告幽门螺杆菌能在33-40.5°C和pH6.6-8.4条件下生长。但实际应用中仍以37°C和pH7.0-7.2为最适条件。幽门螺杆菌对低pH比一般细菌有较强耐受力。电镜下,甚至偶然可见幽门螺杆菌钻入壁细胞的分泌小管中。Clyne等认为酸对幽门螺杆菌既有杀伤作用的一面,亦有保护作用的一面。他们把尿素酶阳性的野生株N6和尿素酶阴性的突变株分别接种在含有或没有10mmol尿素的两个pH范围从2.2到7.2的37°C  PBS中,30min后然后测量活菌数(CFU/ml)、上清液的pH和溶液中的氨量。结果N6株在没有尿素的pH4.5-7.0的PBS中生存良好,甚至在有尿素的起始pH为3.5的溶液中亦能生存。然而野生株和突变株均不能在碱性环境中生长繁殖。存在野生株和尿素的酸性溶液的pH迅速从3.5升至8.45。尿素酶突变株在pH4.5-7.2的溶液中存活,不对尿素起反应。野生株N6暴露于氨的浓度高达80mmol仍能存活。胃的酸性环境可能对存活于尿素中的幽门螺杆菌有杀伤作用。但是幽门螺杆菌决不能存活于含有尿素的正常环境中,因为随后升高的pH的危害性远超过氨的毒性。

早期认为幽门螺杆菌并不在代谢中利用碳水化合物获得能量,而是利用有机酸和氨基酸。但Reymolds等研制了一种合成培养基证明精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸是幽门螺杆菌的必需氨基酸。有一些分离株还需要丙氨酸或丝氨酸。没有葡萄糖时,幽门螺杆菌也不能生长。有适量葡萄糖和丙氨酸时能大大促进其生长。这说明葡萄糖可能是幽门螺杆菌能量和碳源的重要来源之一。幽门螺杆菌只含有MK-6呼吸醌,不含有所有弯曲菌属中普遍存在的甲基化MK-6呼吸醌。

    日期:2015年10月30日  分类:病原菌
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