瑞氏染色的原理和染色方法

摘 要:

瑞氏染色是目前最常用而又最简单的染色方法。瑞氏染料是由碱性染料美蓝和酸性染料黄色伊红组成。新鲜配制的瑞氏染液偏碱,染色效果较差,一般储存3个月以上为佳。染色方法:病料涂片、自然干燥;滴加瑞氏染液,染色3分钟;加等量缓冲液静置3-5分钟;水洗、吸干、镜检。结果:细菌染成蓝色,组织细胞胞浆呈红色,细胞核呈蓝色或紫色。

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瑞氏染色法就是用瑞氏染色液对细菌进行染色,瑞氏染色是目前最常用而又最简单的染色方法。

一、瑞氏染料的组成及染色原理

瑞氏染料是由碱性染料美蓝和酸性染料黄色伊红组成,合称伊红美蓝染料即瑞氏(美蓝-伊红)染料。

伊红钠盐的有色部分为阴离子,无色部分为阳离子,其有色部分为酸性,故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐,呈碱性,美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐,其有色部分为阳离子,无色部分为阴离子,恰与伊红钠盐相反。

瑞氏染料中的酸性伊红和碱性美蓝混合经化学作用后,变成中性伊红化美蓝,如染液放置过久即可氧化而含有天青。美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色,但不能使胞浆染为蓝色,多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色,染色主要是化学作用,是离子彼此结合的反应。

二、瑞氏染色液配制方法

瑞氏染液配制:

瑞氏染料:0.1g

甘油:1.5ml

甲醇:60ml

先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内, 用乳棒轻轻敲碎染料成粉末,再研磨至细粉末,加入甘油和少量甲醇溶解,继续研磨至无染料粉粒沉着,再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮,静置片刻,将上层液体倒入一清洁储存瓶内(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重复数次,直至乳钵内染料完全溶解为止。摇匀,密封瓶口,室温避光保存。

新鲜配制的瑞氏染液偏碱,染色效果较差,经在室温下贮存一定时间,美蓝逐渐转变为天青后方可使用,这一过程称染料成熟。放置时间愈久,天青愈多,染色效果也就越好。一般储存3个月以上为佳。但必须盖严瓶口,以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中加中性甘油的目的也是防止甲醇挥发或氧化,同时也可使血细胞染色较清晰,但使用的甲醇必须纯净。

甲醇是瑞氏染料的良好溶剂,在染色中甲醇还具有两种作用:

(1)甲醇使瑞氏染料中美蓝与伊红在溶液中离解,可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

(2)甲醇具有强大的脱水力,可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积,提高细胞对染料吸收作用,同时由于甲醇吸附染色液中的水,使染色液升温,加速染色反应。

三、染色方法

1、取病料、血液或菌液涂片、自然干燥;

2、滴加瑞氏染液,染色3分钟,使标本被染色液中的甲醇所固定;

3、加等量pH6.4的磷酸盐缓冲液(也可用等量蒸馏水或超纯水代替PBS),轻轻晃动玻片,均匀静置3-5分钟;

4、用蒸馏水冲洗、吸干、镜检。

5、染色结果:细菌染成蓝色,组织细胞胞浆呈红色,细胞核呈蓝色或紫色。

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