葡萄糖氧化发酵试验(O/F试验)用Hugh-Leifson培养基及试验方法

摘 要:

O/F试验即葡萄糖氧化发酵试验。细菌对糖类的利用类型包括发酵型、氧化型和产碱型。Hugh和Leifson设计出Hugh-Leifson培养基(HLGB)以鉴定细菌从糖类产酸是属于氧化型产酸或发酵型产酸。本文主要介绍HLGB培养基的组分、配制方法和试验方法。

关键词:

O/F试验即葡萄糖氧化发酵试验。在细菌鉴定中,糖类发酵产酸是一项重要依据。细菌对糖类的利用有两种类型:一种是从糖类发酵产酸,不需要以分子氧作为最终受氢体,称发酵型产酸;另一种则以分子氧作为最终受氢体,称氧化型产酸。前者包括的菌种类型为多数。氧化型产酸量较少,所产生的酸常常被培养基中的蛋白胨分解时所产生的胺所中和,而不表现产酸。

氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖,无氧的条件下不能分解葡萄糖;发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖;不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。

葡萄糖氧化发酵试验(O/F试验)用Hugh-Leifson培养基及试验方法

基于此原理,Hugh和Leifson提出一种含有低有机氮的培养基,用以鉴定细菌从糖类产酸是属氧化型产酸或发酵型产酸。这一试验广泛用于细菌鉴定。一般用葡萄糖作为糖类代表。也可利用这一基础培养基来测定细菌从其他糖类或醇类产酸的能力。

一、Hugh-Leifson培养基组分

蛋白胨                   2g

氯化钠                   5g

磷酸氢二钾               0.3g

琼脂                     4g

葡萄糖                   10g

0.2%溴麝香草酚蓝溶液     12mL

蒸馏水                   1000mL

二、配制制法

1、将蛋白胨、氯化钠和磷酸氢二钾加水溶解,调节pH至7.2。

2、加入葡萄糖、琼脂煮沸,溶化琼脂。

3、加入指示剂0.2%溴麝香草酚蓝溶液。

4、混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用。

三、试验方法

1、细菌接种 :以18-24h的幼龄菌种,穿刺接种在上述制备的Hugh-Leifson培养基中,每株菌接4管,其中2管用油封盖(凡士林和液体石蜡按1:1比例混合后灭菌),也可于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面进行封盖,约加0.5-1厘米厚,以隔绝空气为闭管。另2管不封油为开管,同时还要有不接种的闭管作对照。适温培养1、2、4、7天观察结果。

2、结果观察:

(1)氧化型产酸:仅开管产酸,氧化作用弱的菌株往往先在上部产碱(1-2天),后来才稍变酸。

(2)发酵型产酸:开管及闭管均产酸,如产气,则在琼脂柱内产生气泡。

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