细菌抗酸性染色法的方法和原理

摘 要:

细菌抗酸染色法是检查抗酸细菌(如结核杆菌、麻风杆菌、分枝杆菌等)的一种特殊染色法,属于复染色法。抗酸染色通常是先以浓石炭酸复红初染,随即以盐酸酒精脱色,最后用美蓝液复染。如属于抗酸细菌,因菌体有抗御酸类脱色的特性,故能保持初染的红色。如属于一般细菌,因菌体无抗酸能力,初染的红色被酸类所脱去,故被复染成蓝色。

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细菌抗酸染色法(又称耐酸染色法)是检查抗酸细菌(如结核杆菌、麻风杆菌、分支杆菌等)的一种特殊染色法,属于复染色法。细菌抗酸染色的方法很多,常用的是先以浓石炭酸复红加温初染,随即以盐酸酒精或硫酸水脱色,最后用美蓝液复染。

一、抗酸染色液的配制

1、石炭酸品红(复红)染色液

碱性品红:0.3g

95%乙醇:10mL

5%酚水溶液:90mL

将品红溶解于乙醇中,然后与酚溶液混合。

2、3%盐酸-乙醇

浓盐酸:3mL

95%乙醇:97mL

3、吕氏碱性美蓝染色液

美蓝(亚甲基蓝):0.3g

95%乙醇:30mL

0.01%氢氧化钾溶液:100mL

将美蓝溶解于乙醇中,然后与氢氧化钾溶液混合。

二、抗酸染色方法

(1)将涂片在火焰上加热固定,滴加较多量的石炭酸品红染色液,在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热至有蒸气出现,维持微微发生蒸汽,但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时,应随时添加。染5min,倾去染液,水洗。

(2)滴加3%盐酸-乙醇脱色,直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定,一般为1-3min),充分水洗。

(3)滴加吕氏碱性美蓝染色液,复染约30-60s,水洗。

(4)吸干或烘干,镜检。

三、抗酸染色结果

如属于抗酸细菌,因菌体有抗御酸类脱色的特性,故能保持初染的红色。其他细菌、细胞等物质因无抗酸能力,初染的红色被酸类所脱去,故被复染成蓝色。

多数细菌可用单染法或革兰氏染色法而着色,但有少数细菌,尤其是分枝杆菌属(Mycobacterium)细菌刚需要用抗酸性染色法进行观察。如分枝杆菌属中的结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis)和麻疯杆菌(Mycobacterium leprae),用抗酸染色法极具诊断价值。

分枝杆菌与其它细菌不同,其细胞壁含有厚的脂质,染料不易渗透。但一经渗透,也不为酸性酒精脱色,故称之为抗酸性。其它细菌刚易被酸性酒精所脱色,属于非抗酸性。

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