琼脂纸片扩散法进行药敏实验室内质量控制的标准操作

摘 要:

该标准操作的实验目的是保证药敏报告的准确性、可靠性及重现性,适用范围为琼脂纸片扩散法(K-B法)。该标准操作的方法包括培养基、试剂、抗生素粉末与抗生素纸片、仪器、操作人员素质和结果判读等。

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一、实验目的

保证药敏报告的准确性,可靠性及重现性。

二、适用范围

琼脂纸片扩散法(K-B法)。

三、方法

(一)培养基

纸片扩散实验必须使用M-H琼脂培养基,因为它不含抑制磺胺药物,而其他种类培养基可能含有与磺胺药拮抗的物质,使其抑菌环变小。

1、培养基的制作过程必须统一,无论是培养基或添加物的剂量、PH值、高温灭菌的时间或温度都需遵照规定。

2、新的粉状脱水培养基打开时,要附厂商、编号、日期、及打开者的姓名。

3、无菌实验:每一批配好的培养基其中抽取5%的量在 35°C或其他适合的温度下隔夜培养,观察有无菌落生长。

4、若是新购的培养基必须观察其颜色与透明度,若有沉淀、浑浊或脱水的现象都必须丢弃,新配好的M-H培养基,用塑料袋包好,储藏于4°C的水箱内,防水蒸发。

5、平板所含培养基的量太多或太少均不宜,如Mueller-Hinton agar的高度不可超过4mm,否则会影响抑菌环的直径(变小)。

6、定期检测培养基的有效性,并对结果加以记录,以便能随时发现问题。

7、培养基要在有效期内使用。

(二)试剂

鉴定细菌实验所用的纸条或纸片,储藏于冰箱时,须附干燥剂,且须注意所标明的有效期限。纸片购入时须作阳性和阴性对照以检查其是否有效,以后可每周做一次。

(三)抗生素粉末与抗生素纸片

检查室诊断过程中所用抗生素粉末必须保持干燥,置冰箱储藏,若其制成高浓度的库存溶液,应该采取少量分装于各小瓶,贮存于-14°C或-14°C以下,一旦取出解冻,未用完的就应丢弃。若抗生素粉末用于稀释试验时,须限已知MIC的微生物作对照。

作药敏用的抗生素纸片应放干燥剂并贮存于-14°C或-14°C以下,若情况不允许,除了penicillins、cephalosporins及oxacillin纸片仍必须冰冻外,其余可置冰箱贮存。从冰箱取出装抗生素纸片的容器,须待其复温至室温后才能打开使用。

每天在作药敏试验时,最好同时取已知敏感的微生物质控菌株作对照,来测验纸片的功效。

(四)仪器

1、培养箱、冰箱等仪器于每天早上上班时须记录温度并校正,使用过程中应注意温度有无变化。

2、CO2 培养箱,要确保其所含的CO2量。

3、厌氧缸在使用时,催化剂要先在160°C干燥箱中加热1-2小时,使其恢复功能,且同时于缸中放入生物指示剂可确定是否绝对无氧。

(五)操作人员素质

操作者应熟悉药敏试验的规范步骤,尤其要注意其影响因素,如:接种菌的浓度不能太高或太低,应标准化;接种要用无菌棉拭子,不可用接种针或接种环,且要使接种菌在平板上分布均匀;纸片间距要合适等。

(六)结果判读

纸片扩散敏感性试验只适用于快速生长菌,不可用于缓慢生长菌,一般培养16-18小时后读取结果。并根据NCCLS抑菌环的判读标准判断药物的敏感与否,但要注意NCCLS的标准常因菌种而异。

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