该标准操作的实验目的是保证药敏报告的准确性、可靠性及重现性，适用范围为琼脂纸片扩散法（K-B法）。该标准操作的方法包括培养基、试剂、抗生素粉末与抗生素纸片、仪器、操作人员素质和结果判读等。
一、实验目的
保证药敏报告的准确性，可靠性及重现性。
二、适用范围
琼脂纸片扩散法（K-B法）。
三、方法
（一）培养基
纸片扩散实验必须使用M-H琼脂培养基，因为它不含抑制磺胺药物，而其他种类培养基可能含有与磺胺药拮抗的物质，使其抑菌环变小。
1、培养基的制作过程必须统一，无论是培养基或添加物的剂量、PH值、高温灭菌的时间或温度都需遵照规定。
2、新的粉状脱水培养基打开时，要附厂商、编号、日期、及打开者的姓名。
3、无菌实验：每一批配好的培养基其中抽取5%的量在 35°C或其他适合的温度下隔夜培养，观察有无菌落生长。
4、若是新购的培养基必须观察其颜色与透明度，若有沉淀、浑浊或脱水的现象都必须丢弃，新配好的M-H培养基，用塑料袋包好，储藏于4°C的水箱内，防水蒸发。
5、平板所含培养基的量太多或太少均不宜，如Mueller-Hinton agar的高度不可超过4mm，否则会影响抑菌环的直径（变小）。
6、定期检测培养基的有效性，并对结果加以记录，以便能随时发现问题。
7、培养基要在有效期内使用。
（二）试剂
鉴定细菌实验所用的纸条或纸片，储藏于冰箱时，须附干燥剂，且须注意所标明的有效期限。纸片购入时须作阳性和阴性对照以检查其是否有效，以后可每周做一次。
（三）抗生素粉末与抗生素纸片
检查室诊断过程中所用抗生素粉末必须保持干燥，置冰箱储藏，若其制成高浓度的库存溶液，应该采取少量分装于各小瓶，贮存于-14°C或-14°C以下，一旦取出解冻，未用完的就应丢弃。若抗生素粉末用于稀释试验时，须限已知MIC的微生物作对照。
作药敏用的抗生素纸片应放干燥剂并贮存于-14°C或-14°C以下，若情况不允许，除了penicillins、cephalosporins及oxacillin纸片仍必须冰冻外，其余可置冰箱贮存。从冰箱取出装抗生素纸片的容器，须待其复温至室温后才能打开使用。
每天在作药敏试验时，最好同时取已知敏感的微生物质控菌株作对照，来测验纸片的功效。
（四）仪器
1、培养箱、冰箱等仪器于每天早上上班时须记录温度并校正，使用过程中应注意温度有无变化。
2、CO2 培养箱，要确保其所含的CO2量。
3、厌氧缸在使用时，催化剂要先在160°C干燥箱中加热1-2小时，使其恢复功能，且同时于缸中放入生物指示剂可确定是否绝对无氧。
（五）操作人员素质
操作者应熟悉药敏试验的规范步骤，尤其要注意其影响因素，如：接种菌的浓度不能太高或太低，应标准化；接种要用无菌棉拭子，不可用接种针或接种环，且要使接种菌在平板上分布均匀；纸片间距要合适等。
（六）结果判读
纸片扩散敏感性试验只适用于快速生长菌，不可用于缓慢生长菌，一般培养16-18小时后读取结果。并根据NCCLS抑菌环的判读标准判断药物的敏感与否，但要注意NCCLS的标准常因菌种而异。
