目前药敏试验的方法主要有：Kirby-Bauer法(K-B纸片扩散法)、稀释法、E test法以及全自动微生物分析仪进行药敏测试。其中由Kirby和Bauer所建立的K-B纸片扩散法是各国临床微生物学实验室广泛采用的药敏试验方法。我国于1995年开始采用NCCLS 1993年和1994年关于药敏纸片法文件中的实验方法，实现了耐药监测方法的标准化。
细菌的耐药性和抗生素的合理使用是全球广泛关注的问题。其中细菌对抗生素敏感试验(以下简称药敏试验)在延缓和控制细菌耐药性、合理使用抗生素方面发挥着重要作用。它能对抗生素临床治疗的效果进行预测、监测耐药量、减少治疗错误。目前药敏试验的方法主要有：Kirby-Bauer法(以下简称K-B纸片扩散法)、稀释法、E test法以及运用全自动微生物分析仪(Vitek、Microscan、Sensititre ARIS、ATB等)进行药敏测试。其中由Bauer和Kirby所建立的纸片琼脂扩散法，即K-B纸片扩散法是各国临床微生物学实验室广泛采用的药敏试验方法 。
1993年美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)法规指出，K-B纸片扩散法适用于快速生长的细菌，它们包括肠杆菌科、葡萄球菌科、假单胞菌属、不动杆菌属、产单核细胞李斯特菌和某些链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎球菌等稍加修改也同样适用，但对苛养菌、厌氧菌、真菌、分枝杆菌等应遵照NCCLS的其他文件规定进行药敏试验。我国于1995年开始采用NCCLS 1993年和1994年关于药敏纸片法文件中的实验方法，实现了国内耐药监测方法的标准化。
一、试验目的
保证纸片扩散法药敏结果的可靠性。
二、试验材料
（一）培养基
1、Mueller-Hinton琼脂平板：只适合肠杆菌科、铜绿假单胞菌、不动杆菌、葡萄球菌、肠球菌、霍乱弧菌。
2、HTM琼脂：只适合嗜血杆菌。
3、GC琼脂＋1%特定的生长因子：只适合淋病奈瑟菌。
4、Mueller-Hinton琼脂＋5%羊血：只适合链球菌。
（二）药敏纸片
抗菌药物纸片直径约为6.0-6.35mm，厚度约1mm，每片的吸水量约20μl。
（三）质控菌株
K-B法质量控制用菌株常规用：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853。
（四）菌液比浊管
接种菌液浓度为1.5×108CFU/ml，相当于0.5麦氏比浊管。
三、试验方法与结果
1、制备接种菌液：挑选琼脂平板上形态相同的菌落移种于M-H液体培养基中，置35°C温箱孵育4h，校正浊度，或用接接种环挑取菌落，置浮于生理盐水中振荡混匀后与标准化浊管比浊，调整浊度与比浊管相同。
2、接种平板：用无菌棉签蘸取已制备好的接种菌液，在管壁上旋转挤压，去掉过多的菌液，涂布整个M-H培养基表面，并保证涂布均匀。
3、贴纸片：待平板上的水分被琼脂完全吸收后（约15分钟），用无菌镊子取纸片贴在琼脂平板表面，并用镊尖轻压一下，使其贴平。每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。
4、孵育：把贴好药敏纸片的平皿放进35°C温箱培养，最好单独摆放，不超过2个叠在一起，孵育18-24小时后，读取结果。
5、判定结果：培养后取出平板，用游标卡尺测量抑菌环的直径，抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限，然后根据抑菌环直径大小、NCCLS判断细菌的敏感性，并加以记录。
参考文献：
[1] 王辉, 徐英春, 陈民钧. 简要介绍美国NCCLS药敏试验绝版扩散法法规（1993年12月版）. 中华医学检验杂志, 1995,18(1):60-62.
[2] 谭瑶, 赵清. K-B纸片扩散法药敏试验. 检验医学与临床, 2010,7(20):2290-2291.
