聚乙二醇(PEG)沉淀法富集浓缩纯化噬菌体

摘 要:

聚乙二醇(PEG)的亲水性强,溶于水和许多有机溶剂。利用PEG能够将噬菌体颗粒从溶液中沉淀下来,从而达到浓缩富集噬菌体的效果。PEG沉淀噬菌体的效率与PEG的聚合程度、浓度和溶液pH值等因素有关。在一定pH值条件下,盐浓度越高,所需PEG的浓度越低。在一定范围内,高分子量和高浓度的PEG沉淀的效率高。

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聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)的亲水性强,溶于水和许多有机溶剂,对热稳定,有广泛围的分子量,在生物大分子制备中,用的较多的是分子量为6000-20000的PEG。

PEG能够沉淀蛋白质,而噬菌体(包括病毒)外壳都含蛋白,所以能够利用PEG沉淀的功能,将噬菌体颗粒从溶液中沉淀下来,从而达到浓缩富集噬菌体的作用。

PEG沉淀噬菌体的效率与PEG聚合程度、温度、浓度和溶液pH值等因素有关。在一定pH值条件下,盐浓度越高,所需PEG的浓度越低。在一定范围内,高分子量和高浓度的PEG沉淀的效率高。

PEG沉淀浓缩噬菌体方法:

1、优化利用宿主菌增殖培养噬菌体的方法,以使噬菌体产量达到最佳。

2、将噬菌体液离心,去除菌体、细菌碎片和其它杂质。

3、在离心后的上清液(含有噬菌体)中慢慢搅动并加入NaCl至终浓度为0.5mol/。

4、再加入等量的10% PEG(通常用PEG6000-8000),混匀。

5、4°C放置过夜。

6、8000 r/min离心30min,弃上清,收集噬菌体沉淀。

7、用适量的SM溶液重悬沉淀。

8、可用超速离心和密度梯度离心法对噬菌体进一步纯化。

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