结核分枝杆菌的定量计数方法

摘 要:

结核分枝杆菌生长缓慢,难以培养,不适于用平板培养菌落计数法进行计数。这一方面容易污染,另一方面由于培养时间长,琼脂平板会由于水分的蒸发而干掉。因此结核菌的CFU测定不能像大肠菌那样采用平板菌落计数法。对结核分枝杆菌进行定量计数时,可先进行10倍梯度稀释,再将稀释液涂布于罗氏斜面培养基,然后计算出CFU。

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通常很少有对结核分枝杆菌进行定量计数的实验,不过在一些特殊情况下,也需要进行结核菌的CFU计数。

由于结核分枝杆菌生长缓慢,难以培养,因此不适于用平板培养菌落计数法进行计数。这一方面容易污染,另一方面由于培养时间长,琼脂平板会由于水分的蒸发而干掉。因此结核菌的CFU测定不能像大肠菌那样采用平板菌落计数法。

对结核分枝杆菌进行定量计数时,可先用液体培养基进行10倍梯度稀释,再将稀释液涂布于罗氏斜面培养基,计数可见到单菌落的培养斜面上的菌落数,然后计算出CFU。

一般斜面面积可达4-5平方厘米,只要菌液的稀释度适当,就能够在斜面培养基上长出可目测计数的单菌落数(n)。假设每个稀释度菌液的体积为v1,接种体积为V2,则cfu/ml=n×V1×稀释倍数/V2。

注意:结核分枝杆菌与一般细菌不同,容易形成菌团,在稀释前应尽量使细菌分散均匀,以尽可能形成单菌落。

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