厌氧菌培养方法

摘 要:

厌氧菌在有氧的情况下不能生长,如产气荚膜梭菌(魏氏梭菌)、肉毒梭菌等厌氧菌,必须在无氧条件下培养。疱肉培养法最简单,无需特殊设备。厌氧罐法是应用广泛,是用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境。厌氧袋法在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。厌氧手套箱是一整套系统,是最佳的厌氧菌培养法,通常用于厌氧细菌的大量培养研究。

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厌氧菌在有氧的情况下不能生长,如产气荚膜梭菌(魏氏梭菌)、肉毒梭菌等厌氧菌,必须在无氧条件下培养。

在厌氧培养时,通常用培养基中加入还原剂,或用物理、化学方法去除环境中的游离氧,以降低氧化还原电势。常用的厌氧培养方法主要有疱肉培养基法、厌氧罐法、厌氧袋法、厌氧手套箱法等,可根据实际情况选用。

一、疱肉培养基法

疱肉培养基法是最简单的厌氧培养法之一,无需特殊设备。将疱肉和肉汤装入大试管,在液面加入凡士林封闭,从而造成无氧环境。在使用前最好将装有培养基的试管沸水浴10-20min,以使培养基中溶解的氧释放出来。

二、厌氧罐法

厌氧罐法是目前应用较广泛的一种厌氧培养方法,是用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境,从而进行厌氧菌的培养。厌氧罐法又分为以下两种:

1、抽气换气法

该法适用于一般实验室,其特点是较经济,可迅速建立厌氧环境。标本接种后,将平板放入厌氧罐,拧紧盖子,用真空泵抽出罐中空气,使压力真空表至-79.98KPa,停止抽气,充入高纯氮气使压力真空表指针回0位。连续反复3次,最后在罐内-79.98KPa的情况下,充入70%的N2、20% H2、10% CO2 (有人改用20% CO2及80% H2,亦可获得好结果)。罐中需放入冷催化剂钯粒,可催化罐中残余的O2和H2化合成水。同时罐中应放有美蓝指示管,美蓝在有氧的环境下呈蓝色,无氧时为红色。临用前首先将美蓝煮沸使变成无色,放入罐中先呈浅蓝色,待罐中无氧环境形成,美蓝即可持续无色。

2、气体发生袋法

气体发生袋系由锡箔密封包装,其中含有两种药片,一种为含枸椽酸和重碳酸氢钠的药片,另一种是含有硼氢化钠的药片。前者遇水放出二氧化碳,后者可释放氢。使用时在袋的右上角剪一小口,灌进10ml蒸馏水,立即放入含有钯粒、指示剂及平板培养基的厌氧罐中,拧紧盖子。经2-3分钟后,可感到盖子微热并有少量水蒸气出现。密封后1小时左右罐中的O2的含量可低于1%。

三、厌氧袋法

厌氧袋法即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。该方法不需要特殊设备,操作简单,使用方便,不但实验室中可用,而且外出采样,现场接种等也可用。原理与气体发生袋法完全相同,只是采用塑料袋代替了厌氧罐,气袋为一透明而密闭的塑料袋,内装有气体发生管(有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿)、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。其操作方法为首先将接种的平板培养基放入袋中,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口。然后先折断气体发生管,20分钟后再折断美兰指示剂管,如果指示剂不变蓝色,说明袋内达到厌氧状态,即可放入37°C进行培养。

四、厌氧手套箱法(anaerobic glove box

厌氧手套箱是一整套系统,是最佳的厌氧菌培养法,通常用于厌氧细菌的大量培养研究。厌氧手套箱是一个密闭的大型箱,箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板,板上装有两个手套,可通过手套在箱内进行操作。厌氧手套箱可调节温度,本身是孵箱或孵箱即附在其内,还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落。使用时应严格遵守操作规程,保证箱内气体比例合理。

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