结核分枝杆菌罗-琴培养基的成份及配制方法

摘 要:

结核分枝杆菌生长缓慢,约18h分裂一代。罗-琴氏(Lowenstein-Jensen)培养基是最常用的结核分枝杆菌培养基,用该培养基2-6周可见到菌落。罗-琴培养基中含有磷酸二氢钾、硫酸镁、拘掾酸镁、天门冬素、孔雀绿、马铃薯淀粉、甘油和鸡蛋液等成份,其中孔雀绿作为抑菌剂,抑制其它细菌生长,加甘油可以防止培养基干裂。

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罗-琴氏(Lowenstein-Jensen,L-J)培养基是最常用的结核分枝杆菌固体培养基。

结核分枝杆菌罗-琴培养基的成份及配制方法

一、罗-琴培养基成分:

磷酸二氢钾2.4g;

一水硫酸镁0.24g;

拘掾酸镁0.6g;

天门冬素3.6g;

2%孔雀绿水溶液20ml;

蒸馏水600ml;

马铃薯淀粉30g;

甘油12ml;

新鲜鸡蛋液1000ml。

其中孔雀绿是作为抑菌剂,抑制其它细菌生长。加甘油可以防止培养基干裂。

二、罗-琴培养基配制方法:

1、量取600ml蒸馏水,置于烧杯中。

2、称取上述量的磷酸盐、硫酸镁、拘掾酸镁、天门冬素和甘油,加入600ml蒸馏水中,加热完全溶解。

3、一边搅拌一边加入马铃薯淀粉,于沸水中水溶1小时,再置于56°C水浴箱内1小时。

4、新鲜鸡蛋液的制备:

(1)将新鲜鸡蛋洗净后,放置于75%乙醇中消毒30分钟。

(2)将鸡蛋从乙醇中取出,沥尽乙醇,点火烧掉鸡蛋外壳上的乙醇。

(3)无菌打破蛋壳,将蛋白和蛋黄收集于灭菌容器内,充分搅拌,无菌纱布过滤。

5、量取制备的新鲜鸡蛋液1000ml,加入第3步制备的混合液中,搅拌混合均匀。

6、加入灭菌的2%孔雀绿水溶液,搅拌混合均匀,分装于灭菌的试管内,加塞封闭,斜置于试管架上,85°C 1小时间歇灭菌2次。

7、灭菌好的培养基放置于冰箱保存备用。

注:由于培养基中有抑菌剂孔雀绿成份,所以罗-琴培养基呈绿色。

结核分枝杆菌生长缓慢,约18h分裂一代。用罗-琴培养基培养2-6周方可见到菌落,菌落多为粗糙型,不透明,乳折色或米黄色,呈干燥颗粒状,形似菜花。

结核分枝杆菌罗-琴培养基的成份及配制方法

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