支原体定量计数方法——颜色改变单位法(CCU)

摘 要:

由于支原体的液体培养物是澄清透明的,呈现为清亮透明红色,因此无法通过比浊法进行支原体的定量计数。此外,由于支原体固体培养很困难,用cfu法也不易计数,因此常用颜色改变单位法(CCU)进行支原体的计数。CCU法是以微生物在培养基中的代谢活力为指标,来计数微生物的相对含量。

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微生物实验中,经常会涉及到对微生物进行定量计数,一般来说,比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数,但由于支原体的液体培养物是澄清透明的,呈现为清亮透明红色,因此一般的比浊法无法用于支原体的计数。此外,由于支原体固体培养很困难,用cfu(菌落形成单位)法也不容易计数,因此需要用特殊的计数方法,即颜色改变单位法(colour change unit,CCU)。CCU法是以微生物在培养基中的代谢活力为指标,来计数微生物的相对含量。

根据支原体生化反应的特性在培养其中添加葡萄糖(0.5%)、精氨酸(0.2%)或尿素(0.1%),同时加0.002%酚红指示剂;对分解葡萄糖支原体,培养基pH值调至7.8;分解精氨酸培养基pH值调至7.0;分解尿素的pH值调至6.0。

下面简单介绍CCU法定量计数支原体的实验操作方法:

(1)取12只无菌小试管,每管中加入1.8ml支原体液体培养基。

(2)10倍梯度稀释。即在第1管加入0.2ml待测支原体菌液,充分混匀后,从中吸取0.2ml加入第2管,依次类推,10倍梯度稀释,一直到最后一管。

(3)将所有管置于37°C温箱中培养培育14d,以培养基颜色出现变化的最高稀释度作为待测支原体的CCU,也就是支原体的最大代谢活力。如到第6管出现颜色改变,亦待测支原体液被稀释至107仍有支原体生长,则待测支原体的CCU为:107 CCU/ml。

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