肺炎支原体(Mp)实验室分离培养方法

摘 要:

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)是引起支气管炎和原发性非典型肺炎的重要病原体,专性细胞内寄生,能在人工培养基上生长,但生长缓慢。支原体形态多变,具高度多形性,球形、梨形、分枝的或螺旋的丝状等。营养要求苛刻,在高血清量(10-20%)的复杂培养基上生长,在固体培养基上菌落呈”油煎煎荷蛋”状,边缘不整齐。

关键词: , , , , ,

支原体Mycoplasma)又称霉形体,是一类缺乏细胞壁的很小的原核细胞,它既不同于细菌,也不同于病毒,是介于细菌和病毒之间,能在无活细胞的人工培养基上生长繁殖的最小微生物。它广泛分布于自然界,与人类、 动植物的疾病有密切的关系。支原体的种类繁多,造成的危害非常广泛。目前证明对人体有致病作用的支原体有肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体等几种,临床以肺炎支原体最为常见。

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)是引起儿童和成人支气管炎和原发性非典型肺炎的一种重要病原体,专性细胞内寄生,能在人工培养基上生长,但生长缓慢,通常需一周以上。

支原体形态多变,具高度多形性,球形、梨形、分枝的或螺旋的丝状等。营养要求苛刻,在高血清量(10-20%)的复杂培养基上生长,在固体培养基上菌落呈油煎荷包蛋样特征性外观。

肺炎支原体(Mp)实验室分离培养方法

一、标本采集

支原体常侵及人和动物的粘膜表面,一般可用棉花拭子涂抹取样后放入2-3ml支原体液体培养基的小管中,或取其分泌液,若标本是组织块,可在灭菌乳钵或玻璃匀浆后接种,取样后应尽快接种培养。

二、分离培养

1、支原体固体培养基接种法

转动拭子将标本液体尽量挤出,用无菌滴管吸1-2滴接种在平皿上盖好,用L棒涂抹或倾斜转动平皿使标本均匀分布,置37°C孵育。

2、支原体半固体培养基接种法

混种法:在制备半固体培养基时,培养基加热溶化,温度降至50°C时,添加动物血清、酵母浸液及青霉素后混匀,待冷却至37-40°C时,用无菌滴管吸取标本0.5-1ml加入培养基中,充分混匀,凝固后置37°C孵育。

3、穿刺接种法:方法同细菌接种法。

三、结果观察

绝大多数支原体为兼性厌氧,少数在含10% CO2和相对湿度80-90%的大气环境中生长良好。支原体生长缓慢,多数于3-4d长出菌落,少数于1-2w方长出典型菌落,在平皿固体培养基上生长的菌落呈"油煎蛋"状,边缘不整齐。

肺炎支原体(Mp)实验室分离培养方法

四、糖酵解培养基(肺炎支原体培养基)

1、配方一:

基础培养基 70ml

马(或牛血清) 20ml

25%酵母浸液 10ml

0.4%酚红 0.5ml

1%醋酸铊 2.5ml

青霉素10000IU/ml 5.0ml

调pH 7.8

2、配方二:

PPLO 21g(商品化买)

酵母粉 6g(OXIDE)

马血清 200ml(可用小牛血清代替)

L-半胱氨酸 0.3g

葡萄糖 10g

1%酚红 4ml

AMP 若干(0.1-0.2g,醋酸铊有毒性,可不加)

调pH 7.5-7.6

五、牛心汤复合培养基配方

牛心汤1000ml

蛋白胨10g

氯化钠5ml

酵母提取液10ml

无菌马血清200ml

1.25%醋酸铊溶液20ml

青霉素200IU/ml。

    日期:2015年03月27日  分类:病原菌
    A+

除注明外,本站内容由 细菌之家 原创或整理,转载请注明出处及链接。

本文永久链接: http://www.bacteria.cn/html/2015/1236.html

  • 请您留言:专业水平所限,谬误之处在所难免。如您发现不正之处,请在下面留言,谢谢!

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen:

图片 表情