麦氏浊度法和光密度(OD值)法测量细菌数量的特点和区别

摘 要:

在微生物实验中,经常会涉及到测量细菌总数量。测定方法主要有平板计数法、光电比色法和麦氏比浊法。平板计数法最准确。光电比色法是测量菌悬液的光密度(OD600)值,麦氏比浊法是测量菌悬液的透光量(浊度值)。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,这两种方法的优点是简便、迅速,可以连续测定。

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微生物实验中,经常会涉及到对细菌进行定量,也就是对细菌的总数量进行测定。测定细菌数的方法主要有平板计数法、光电比色法和麦氏比浊法

通常来说,平板计数法最准确,能够准确测量出菌液中的活菌数。不过该方法操作比较麻烦,耗时较长。光电比色法是通过测量菌悬液的光密度(OD600)值来估算细菌数,麦氏比浊法通过测量菌悬液的透光量(浊度值)来估算细菌数,细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,这两种方法的优点是简便、迅速,可以连续测定,适合于自动控制。

但是,由于光密度或透光度除了受菌体浓度影响之外,还受细菌细胞大小、形态、培养液成分以及所采用的光波长等因素的影响。因此,OD600值法和麦氏比浊法的测量结果不很准确,只是一种比较粗略细菌总数测量方法。对于不同微生物的菌悬液进行光密度或光电比浊计数时,应采用相同的菌株和培养条件制作标准曲线。光波的选择通常在400~700nm之间。此外,对于颜色太深的样品或在样品中还含有其他干扰物质的悬液不适合用此法进行测定。

麦氏标准(McFarland Standards)管的配制

在对菌悬液进行麦氏比浊法测定时,需要配制麦氏标准(McFarland Standards)管,配制方法如下:

麦氏标准管(McFarland Standards)配制

麦氏标准管号BaCl2(浓度1.175%)(ml)H2SO4(浓度1%)(ml)细菌数 ×10^8CFU/ml
麦氏标准管号BaCl2(浓度1.175%)(ml)H2SO4(浓度1%)(ml)细菌数 ×10^8CFU/ml
0.50.599.51.5
11.099.03.0
22.098.06.0
33.097.09.0
44.096.012.0
55.095.015.0
66.094.018.0
77.093.021.0
88.092.024.0
99.091.027.0
1010.090.030.0

在临床微生物学检验中,麦氏比浊法常用于细菌鉴定、药敏实验前配置菌液时大致判断菌液浓度。通常情况下,当菌悬液的麦氏浊度为0.5时,细菌浓度相当于1.5×108CFU/ml,如金黄色葡萄球菌,不过不同的细菌也会有所差别。

例如绿脓杆菌菌液OD600值为0.1时,约相当于108CFU/ml,OD600值为1.0时,约相当于109CFU/ml。

细菌菌悬液OD值和麦氏浊度的换算

根据美国CLSI(以前称NCCLS)推荐的方法,将菌液调整至OD625值在0.08-0.13之间就相当于0.5麦氏浊度了。

但是,由于不同细菌折光率是不同的呀,所以这只是一种粗略的换算关系,只具有一定的参考价值。

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