试管培养法检测鉴定细菌生物膜(菌膜)的实验操作方法

摘 要:

生物膜是具有一定结构和功能的高度组织化的细菌群体。试管培养法所形成的生物膜沿液面紧贴试管壁向下生长,在液面形成一层较薄的膜,管壁上的膜与试管的粘附性较高。试管法简单、快捷,被广泛应用于生物膜的初步定性检测。但由于结果判定主观因素较强,因此只能用于初步鉴定细菌是否具有形成生物膜的能力,不适用于深入研究。

关键词: ,

生物膜是具有一定结构性和功能性的高度组织化的微生物群体,是微生物为其自身创造的独特生存方式。生物膜营养需求低,对水流剪切力的忍受度强,适应的pH范围广。

试管法(glass tube method)是一种简单、快捷的一种细菌生物膜鉴定方法。静置培养时,用试管培养法所形成的生物膜沿液面紧贴试管壁向下生长,常在液面形成一层较薄的膜,液面膜与试管结合,管壁上的膜与试管的粘附性较高。该方法所需试剂和仪器等试验条件较低,被广泛运用于细菌生物膜的初步定性检测。

一、主要试剂和仪器

培养基、玻璃试管、37°C恒温振荡器、烘箱、超净工作台和结晶紫染料等。

二、实验操作步骤

(1)挑取待检单克隆菌株接种于培养液,37°C振荡培养过夜;

(2)转接20μl过夜培养物加入装有2ml培养液的玻璃试管中;

(3)在37°C恒温振荡器上以150 r/min培养12-16h(根据不同细菌生长速度不同,培养时间可相应调整);

(4)将试管中的培养液倒净后,加入2.5ml的1%结晶紫溶液,室温孵育5min;

(5)将试管中的结晶紫染色液倒净后,流水冲洗试管3-5min;

(6)把试管倒置在滤纸上除去残余的水,在37°C烘箱中烘干,观察、记录。设置空白对照。

试管培养法检测鉴定细菌生物膜(菌膜)的实验操作方法

 

 

三、试管法的局限性

由于受肉眼观察和结果判定存在主观差异的局限性,试管鉴定法对生物被膜微观形态的观察并不理想。因此,此方法只能用于初步鉴定细菌是否具有形成生物膜的能力,不适用于对生物膜的深入研究。但是如果需要大批量地检测细菌是否具有形成生物膜的能力,试管法是一个不错的选择。

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