布鲁氏菌AMOS-PCR多重PCR检测、鉴定和分型方法

摘 要:

布鲁氏菌AMOS-PCR多重PCR检测鉴定方法是根据布鲁氏菌不同种插入序列IS711位置的不同而设计引物。利用AMOS-PCR方法,在不同种的布鲁氏杆菌中能够得出不同的扩增片段,通过扩增条带的大小来鉴别布鲁氏菌种。AMOS-PCR方法有较强的应用价值,可作为快速检测鉴定布鲁氏菌的方法之一。

关键词: ,

1994年,Bricker和Halling将多重PCR方法应用于布鲁氏菌的检测鉴定研究,建立了AMOS-PCR (Abortus Melitensis Ovis Suis第一个字母的缩写)检测鉴定分型方法。

AMOS-PCR是根据布鲁氏菌不同种插入序列IS711位置的不同而设计引物,其他不同的引物分别位于插入序列邻近的染色体DNA上。即设计一个共用引物锚定于插入序列IS711上,再以羊布鲁氏菌生物1、2和3型特有序列设计引物BM,以猪布鲁氏菌生物1型特有序列设计引物BS,以牛布鲁氏菌生物1、2和4型特有序列设计引物BA,以绵羊附睾种布鲁氏菌特有序列设计引物BO。

AMOS-PCR多重PCR鉴定布鲁氏菌的引物

引物名称引物序列 (5'-3')扩增产物
引物名称引物序列 (5'-3')扩增产物
IS711TGC CGA TCA CTT AAG GGC CTT CAT-
BMAAA TCG CGT CCT TGC TGG TCT GA731 bp
BSGCG CGG TTT TCT GAA GGT TCA GG285 bp
BAGAC GAA CGG AAT TTT TCC AAT CCC498 bp
BOCGG GTT CTG GCA CCA TCG TCG976 bp

通过AMOS-PCR设计的5条引物,在不同种的布鲁氏杆菌中能够得出不同的扩增片段,代表种的特异性,通过扩增条带的大小来鉴别布鲁氏菌种。应用该方法可在短时间内鉴定牛种布鲁氏菌(1、2、3型),羊种布鲁氏菌(1、2、3型),猪种布鲁氏菌(1型)以及绵羊附睾种布鲁氏菌。有大量研究利用AMOS-PCR对不同布鲁氏菌分离株进行了检测鉴定,检测结果与表型鉴定的吻合度非常高,且对部分表型鉴定的非典型菌株也可以做出鉴定。AMOS-PCR方法有较强的应用价值,可作为快速鉴定布鲁氏菌的方法之一。

参考文献:

Bricker BJ and Halling SM. Differentiation of Brucella abortus bv. 1, 2, and 4, Brucella melitensis, Brucella ovis, and Brucella suis bv. 1 by PCR. J Clin Microbiol. 1994,32(11): 2660–2666.

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