广宿主穿梭质粒pAT18和pAT19质粒图谱和基本结构

摘 要:

广宿主穿梭质粒pAT18和pAT19能在不同细菌之间接合转移,长度约为6.6 kb,基本结构包括pAMβ1复制起始位点、红霉素抗性基因、RK2转移起始位点、多克隆位点和报告基因。pAT18和pAT19能在大肠杆菌和多种革兰氏阳性菌中稳定复制,包括枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、单核细胞李斯特菌、粪肠球菌、乳酸乳球菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌和炭疽芽孢杆菌等。

关键词: ,

pAT18和pAT19是由Trieu-Cuot等构建的能通过接合转导在不同细菌之间转移的穿梭质粒,长度约为6.6 kb,含有10个多克隆位点。

一、pAT18pAT19质粒图谱

广宿主穿梭质粒pAT18和pAT19质粒图谱和基本结构

二、pAT18pAT19质粒结构

广宿主穿梭质粒pAT18和pAT19的基本结构包括:

(1)pUC质粒和广宿主肠球菌质粒pAMβ1的复制起始位点;

(2)在革兰氏阴性和阳性菌中都表达的红霉素(erythromycin)抗性基因;

(3)IncP质粒的RK2转移起始位点;

(4)分别来自于pUC18中(pAT18)和pUC19(pAT19)的多克隆位点和lacZ alpha报告基因。

三、pAT18pAT19质粒宿主范围

pAT18和pAT19是广宿主穿梭质粒,能在大肠杆菌和多种革兰氏阳性菌中稳定复制。有研究表明,质粒pAT18、pAT19及其重组质粒已经成功的通过接合转导的方法从大肠杆菌转移到多种革兰氏阳性菌,包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、猪链球菌(Sterptococcus suis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和炭疽芽孢杆菌等,转导频率范围约10-6——10-9。如果在受体菌中存在受体限制系统,将会显著影响转导效率,可能会降低3个数量级。有研究表明,pAT18质粒能在炭疽芽孢杆菌中复制并稳定存在,拷贝数约每个细胞20-50个[2-3]。

参考文献:

[1] Trieu-Cuot P, Carlier C, Poyart-Salmeron C, et al. Shuttle vectors containing a multiple cloning site and a lacZ alpha gene for conjugal transfer of DNA from Escherichia coli to gram-positive bacteria. Gene. 1991,102(1):99-104.

[2] Candela T, Moci M, Fouet A. CapE, a 47-amino-acid peptide, is necessary for Bacillus anthracis polyglutamate capsule synthesis. J Bacteriol, 2005,187(22):7765-7772.

[3] Nicholas H. Bzcillus anthracis and Anthrax. Bergman. 2011, P62.

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