革兰氏染色的原理、试剂及染色方法

摘 要:

革兰氏染色法是最经典、使用最广泛的细菌染色方法。通过革兰氏染色,可以将细菌分为两大类,革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)。其原理主要是根据细菌细胞壁的成分和结构不同,经染色后,G+细菌呈蓝紫色,G-细菌呈现红色。但革兰氏染色难以观察到细菌的一些特殊结构(如荚膜)。

关键词:

革兰氏染色法是最经典,也是使用最广泛的细菌染色方法,1884年由丹麦医师Gram创立。革兰氏染色属复染法。革兰氏染色也有其不足之处,难以观察到细菌的一些特殊结构(如荚膜),因此在进行细菌鉴定时,往往还需要结合其它染色方法。

一、革兰氏染色原理

革兰氏染色的原理主要是根据细菌细胞壁的成分和结构不同,将细菌分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)。G+细菌的细胞壁主要有肽聚糖形成的网状结构组成,在染色过程中,当用95%乙醇处理时,由于脱水而引起网状结构中的孔径变小,细胞壁通透性降低,使结晶紫-碘复合物被保留在CW内而不易脱色,因此呈蓝紫色。G-细菌的细胞壁中肽聚糖含量低,脂类物质含量高,当用乙醇处理时,脂类物质溶解,细胞壁的通透性增加,使结晶紫-碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色,然后又被染上了复染剂的颜色,因此呈现红色。

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二、染色方法

1、制片、固定;

2、滴加草酸铵结晶紫染色液于涂抹面,染色1-2 min,水洗;

3、滴加革兰氏碘液,作用1 min,水洗;

4、滴加95%乙醇脱色,约30 s,水洗;

5、滴加复染液(番红或复红染液),复染1-2 min,水洗;

6、干燥,镜检。

三、革兰氏染液及试剂:

1、草酸铵结晶紫染色液:结晶紫1g,95%乙醇20ml,1%草酸铵水溶液80ml。将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。

2、革兰氏碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,待完全溶解后,再加蒸馏水至300 mL。

3、沙黄复染液:沙黄0.25 g,95%乙醇10ml,蒸馏水90ml。将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。

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