甘油盐水冷冻保藏细菌菌种的原理及方法

摘 要:

由于加入生理盐水能降低甘油的高渗作用,因此甘油-生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液。此方法保藏菌种时间一般为2-4年。其主要原理是靠低温来降低微生物活性,达到保存的目的。加甘油是为了避免水结冰产生冰晶损伤细胞,甘油还有隔绝空气、衡湿、调节渗透压、并在冷冻过程中起冷冻保护剂的作用。

关键词:

本方法适合于中、长期菌种保藏,保藏时间一般为2-4年左右。其主要原理是靠低温来降低微生物活性,达到保存的目的。加甘油是为了避免水结冰产生冰晶损伤细胞。在细胞和病毒的冻存过程中,会形成冰晶损伤和溶质损伤,加入甘油的目的是为了防止这两者对细胞和病毒的损伤。甘油还有隔绝空气、衡湿、调节渗透压、并在冷冻过程中起冷冻保护剂的作用。

保存方法:
(1)配制50%的甘油-生理盐水:将甘油和生理盐水按1:1(v/v)比例混匀,高压灭菌,放置于4℃冰箱待用。

(2)将鉴定好的细菌接种于液体培养基,在细菌的最适温度下培养至菌液OD600为1.0-1.5。

(3)将新鲜培养的菌液与50%甘油-生理盐水按1:1(v/v)比例混匀后,分装于事先灭菌的菌种冻存菌,-70℃或液氮保存。

该法适用于一般细菌的保存,同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种,适用范围广,操作简便,效果好,无变异现象发生。甘油-生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液,其原因可能是加入生理盐水降低了甘油的高渗作用。

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