合成引物时的OD值是什么意思?

摘 要:

合成引物时,为了确定引物浓度,可以在260nm波长下(OD260)测量光密度,然后使用光吸收值和微摩消光系数的倒数(nmol/OD),通过Beers法则计算出引物浓度。通常1个OD值的合成引物DNA的质量约为33ug,即1 OD260= 33 ug/ml。

关键词:

在合成引物时,公司通常要求标注合成引物的浓度,通常用OD值表示,如1OD、2OD、5OD等。对于初学者平说,可能不知道这里OD值代表的意义是什么。

其实OD (optical density)值即光密度值。DNA采用紫外吸光谱法定量,一个OD值的定义为在260nm波长下,1ml体积水溶液,1cm光程,吸光度为1A。

合成引物时,为了确定引物浓度,可以在260nm波长下(OD260)测量吸光度,然后使用光吸收值和微摩消光系数的倒数(nmol/OD),通过Beers法则计算出引物浓度。

通常1个OD值的合成引物DNA的质量约为33ug,即1 OD260= 33 ug/ml。

如果进行PCR扩增克隆等实验,通常合成1-2OD值的引物就足够了。如果合成引物后进行大规模的PCR筛查检测等实验,建议合成5OD或以上量的引物。

通常情况下,引物浓度建议用10~20pmol/ul,PCR反应体系中引物的浓度在0.1~1pmol/μl。

溶解引物的时候要注意:真空干燥的DNA呈干膜状或粉末状在离心管底部,开启管盖时小心不要丢失,最好在开启管盖之前先将管进行短暂离心,再加入适量的ddH2O充分振荡溶解。

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