测定质粒在重组菌中稳定性的实验方法

摘 要:

质粒在重组菌中的稳定性与多种因素有关,如质粒自身的特性、宿主菌的遗传特性、细菌的培养条件等。本文主要介绍测定质粒在重组菌中稳定性的实验方法。当然,在实际实验过程中,所使用的抗生素种类、细菌培养方法、传代数等要根据所用质粒和宿主菌进行确定。

关键词:

质粒在重组菌中的稳定性与多种因素有关,如质粒自身的特性、宿主菌的遗传特性、细菌的培养条件等。下面以质粒pBR325和大肠杆菌DH5α为例,介绍测定质粒在重组菌中稳定性的实验方法:

1、将冻存的带质粒的重组大肠杆菌DH5α(pBR325)接种到5ml LB培养基,加氨苄青霉素(Amp)至终浓度为100μg/ml,37℃振荡培养过夜。

2、取新鲜培养的菌液50μl接种到5ml不含抗生素的LB培养基(即按1:100的量接种),37℃振荡培养12h,此为传1代。

3、按第2步的方法,从上一代的培养液中取菌液再传代,如此连续传代培养100代。

4、每隔5代,分别用含抗生素和不含抗生素的LB琼脂平板进行活菌计数。

5、根据不同平板活菌计数结果,分析质粒的稳定性,即:(含抗生素平板上的细菌数/不含抗生素平板上的细菌数)×100%。

上述方法是根据质粒pBR325和大肠杆菌DH5α为例进行介绍,在实际实验过程中,所使用的抗生素种类、细菌培养方法、传代数等要根据所用质粒和宿主菌进行确定。

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