免疫组化实验防止非特异性背景染色的方法

摘 要:

免疫组化染色实验过程中,非特异性染色最常见的原因是由于抗体吸附到组织切片中高度荷电的胶原和结缔组织成分上,从而出现背景着色。为了防止这种非特异性的背景着色现象,可在染色前,用2%~10%羊血清或2%牛血清白蛋白在室温下与组织切片预先作用10-30min,然后进行染色。在稀释特异性抗体时可采用含1%非免疫血清的PBS缓冲液。

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免疫组化染色实验过程中,非特异性染色最常见的原因是由于抗体吸附到组织切片中高度荷电的胶原和结缔组织成分上,从而出现背景着色。

为了防止这种非特异性的背景着色现象,最好用特异性抗体来源的同种动物灭活的非免疫血清在特异性抗体之前进行处理,以封闭荷电点,不让一抗与之结合,但这种方法一般实验室很难实现。

一般情况下,可在染色前,用2%~10%羊血清或2%牛血清白蛋白在室温下与组织切片预先作用10-30min,然后进行染色。但应注意此种结合是不牢固结合,所以最好不要冲洗,倾去余液直接加一抗。对于多克隆抗体来讲,易产生背景着色,在稀释特异性抗体时可采用含1%非免疫血清的PBS缓冲液。

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