免疫组化实验去除内源性酶、生物素及碱性磷酸酶的方法

摘 要:

进行免疫组化标记实验的通常都是生物体组织,在这些组织中都含有一定量的内源性酶和内源性生物素。因此在实验的时候,应设法除去组织标本中的内源性酶、生物素和碱性磷酸酶,以保证实验的特异性。通常用3%过氧化氢处理去除内源性酶,用0.01%卵白素处理消除内源性生物素的活性,用左旋咪唑或酒石酸灭活碱性磷酸酶。

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进行免疫组化标记实验的通常都是生物体组织,在这些组织中都含有一定量的内源性酶和内源性生物素。免疫组化的染色方法大都是用过氧化物酶来标记抗体,酶的作用是催化底物,使显色剂显色,而组织中的内源性酶同样也能催化底物,使其显色,这就会影响免疫组化的特异性,所以在标记抗体的过氧化酶之前就应设法将组织中的内源性酶灭活,以保证免疫组化染色的特异性。

1、去除内源性酶

常用的去除内源性酶的方法是3%过氧化氢水溶液。但在血细胞含量丰富的标本中,由于其中含有大量的具有活性的过氧化物酶,能与过氧化氢反应,出现气泡现象,易对组织结构和细胞形态产生一些不良影响。

用3%过氧化氢处理的方法,能够去除大部分内源性酶,即使有些血细胞在显色后也出现棕黄色反应,但由于其形态结构与组织细胞不同,也易鉴别,而且此方法比较通用易操作,但应注意过氧化氢的浓度不能过高,一般为3-5%,时间不宜过长,最好控制在室温处理10min即可。

2、去除内源性生物素

在正常组织细胞中也含有生物素,特别是肝、脾、肾、脑、皮肤等组织中,在应用亲和素试剂的染色中,内源性生物素易结合卵白素,形成卵白素-生物素复合物,导致出现假阳性,因此在采用生物素方法染色之前,应将组织切片用0.01%卵白素溶液室温处理20min,使其结合位点饱和,以消除内源性生物素的活性。

3、灭活碱性磷酸酶

最常用的方法是将左旋咪唑(每毫升加24mg)加入底物液中并保持pH值为7.6-8.2,能除去大部分内源性碱性磷酸酶,对于仍能干扰染色的酸性磷酸酶可用0.05mo1/L酒石酸抑制。

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