免疫金银染色(Immurogold-sliver staining,IGSS)方法的优缺点

免疫金银法(Immurogold-sliver method,IGSM)或称免疫金银染色(Immurogold-sliver staining,IGSS)是在免疫金法的基础上发展形成的一种新的免疫组织化学技术,近年来又不断改进,已成为最为灵敏而又经济的方法之一。

免疫金和免疫金银法都是利用胶体金作为标记物。

1、免疫金法

免疫金法是用胶体金(直径>20 nm)标记的间接抗体或A蛋白再与特异性抗体结合,在光镜下就可见红色的反应物出现,不需进行呈色反应。但该法要求金标抗体浓度高,因此,价格昂贵,既不经济同时也不够敏感。

2、免疫金银染色(IGSS)

免疫金银染色是在免疫金染色的基础上,在对苯二酚存在的情况下,通过含银离子的显影液中的还原反应,使在抗原抗体反应部位的金粒子周围形成很多沉淀层,光镜下就可看到阳性反应部位呈清晰的棕黑色,从而显示不易被光镜定位的金粒,显示出组织中抗原的部位。这种方法不仅提高灵敏度,同时金标记抗体可以稀释10倍以上后应用,此外还可避免使用具有致癌危险的有机色素。

IGSS法的主要优点是:

(1)敏感性高。与其他的免疫组织化学技术相比,IGSS法被认为是最敏感的方法,尤其适合于只含微量抗原的组织标本。

(2)应用范围广。IGSS法不仅可以在冰冻切片,细胞涂片以及培养细胞、石蜡切片上进行光镜观察,而且还能应用于树脂包埋的切片的电镜观察,并且能准确定位抗原。

(3)定位准确。IGSS法的银颗粒沉积一般无扩散,定位较为准确。

(4)方法简便、安全、成本低、经济、同时标本也可以长期保存。

(5)用醋酸银代替硝酸银和乳酸银,不仅保持了原有方法的敏感性、特异性、低背景、对比度好的特点,而且整个显影过程可以在常光下进行,从而弥补了在暗室显色的不足。

IGSS法的主要问题是非特异性背景,由于其非特异性背影染色影响了IGSS法在常规免疫组织化学鉴别诊断上的应用。但若能较好地控制染色的各关键环节,如特异性抗体的纯度,特异性;切片的消化以及显影液的配制和显影时间的控制等,能较好地解决这一问题。

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