细菌平板菌落计数方法

摘 要:

平板菌落计数法是将待测样品适当稀释后,取一定量的稀释液涂布到平板上,每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落代表原样品中的一个单细胞,即菌落形成单位(colony-forming units,CUF)。该方法是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的,菌液中的死亡细菌或无繁殖能力的细菌不包括在内。

关键词:

平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出原始样品中的含菌数。该方法是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的,菌液中的死亡细菌或无繁殖能力的细菌不包括在内,其计数单位是菌落形成单位(colony-forming units,CUF)。

细菌平板菌落计数操作方法如下:

1、取一定量(如100μl)的菌悬液,进行10×倍梯度系列稀释;

2、取一定量(如100μl)稀释液均匀涂布于平板培养基,每个稀释度至少涂3个平板;

3、根据待计数细菌的培养特性,将涂好的平板放置于适当的条件下进行培养;

4、待平板上长出菌落后,选取稀释度最合适的平板(通常菌落数为数十至数百个之间),数平板上的菌落数,根据稀释度和涂平板的液体量,换算出原始菌液中的活菌数。通常单位是CUF/ml,即每ml原始菌液中有多少个活菌数。

注意事项:

1、一般选择每个平板上长有30-300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。

2、同一稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大,否则表示试验不精确。

3、为了减少误差,同一稀释度重复对照平板最好不要少于3个。

4、计数稀释度平板的菌落数与上下相邻稀释度平板的菌落数基本呈10倍量关系,否则表示稀释度不准确。

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