流式细胞术常见问题及原因分析

流式细胞术(Flow Cytometry,FC)是利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速(每秒可达1000-10000个)的定量分析和分选(纯度可达99%以上)的技术。流式细胞术中的常见问题及原因分析如下:

1、荧光强度/背景过高

(1)一抗/二抗浓度太高,建议降低一抗/二抗浓度。

(2)封闭不完全,建议增加蛋白封闭时间。

(3)洗涤不充分,建议增加冲洗次数与时间。

2、信号弱或无信号

(1)无目的蛋白或表达量极少,建议选用表达量高的细胞。

(2)细胞通透性差,建议增加通透剂的作用时间或浓度。

(3)一抗/二抗浓度太低,建议增大其浓度。

(4)二抗选择错误(种属不匹配),建议选用与一抗种属相匹配的二抗。

3、柱形图分析时出现荧光双峰

(1)抗原本身特性所决定(比如不同时期的细胞蛋白表达量不同)

(2)进样针堵塞,建议清洗管路。

(3)进样速度太快,建议调低进样速度。

(4)管路系统偏移导致焦距偏离,建议请专业维修人员校准。

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