免疫荧光常用荧光染料的种类、原理及选择

摘 要:

免疫荧光技术是利用抗原与抗体的特异性结合原理及特殊的荧光素标记技术,在荧光显微镜下观察荧光的变化进行分析的技术。常用的荧光色素包括:细胞核染料:DAPI、Hoechst 33342、碘化丙啶 (PI);细胞浆染料:鬼笔环肽(phalloidin);荧光抗体用荧光色素:异硫氰酸荧光素(FITC)、四乙基罗丹明(RIB200)和四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)。

关键词: , ,

免疫荧光(Immunofluorescence,IF)技术是利用抗原与抗体的特异性结合原理及特殊的荧光素标记技术,通过激光激发使荧光素发出荧光,在荧光显微镜下观察荧光的变化从而对抗原进行分析的技术。免疫荧光具有特异性强、敏感性高、速度快等特点。

免疫荧光常用的荧光色素包括以下几类:

1、细胞核衬染染料

(1)DAPI:一种能与DNA强力结合的荧光染料,可以透过完整的细胞膜,因此常用于活细胞和固定细胞的染色。最大吸收波长为358nm,最大发射波长为461nm,其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。

(2)Hoechst 33342:一种DNA结合型荧光染料,可以嵌合到碱基分子中,在紫外激发光作用下发出兰色荧光。能够透过完整的细胞膜,可用于活细胞染色。

(3)碘化丙啶 (PI):一种溴化乙啶的类似物,能嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。

2、细胞浆衬染染料

鬼笔环肽(phalloidin):由鬼笔鹅膏真菌(Amanita phalloides)产生的一种环肽。可与F肌动蛋白结合,使F肌动蛋白保持稳定。其荧光标记物是鉴定F肌动蛋白的重要试剂。

3、免疫荧光抗体用荧光色素

(1)异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC):应用最广泛的荧光素,黄色或橙黄色结晶粉末,易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4,最大吸收光波长为490-495nm,最大发射光波长520-530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。

(2)四乙基罗丹明(rhodamine,RIB200):橘红色粉末,不溶于水,易溶于酒精和丙酮。性质稳定,可长期保存。最大吸收光波长为570nm,最大发射光波长为595-600nm,呈橘红色荧光。

(3)四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethyl rhodamine isothiocyanate,TRITC):最大吸引光波长为550nm,最大发射光波长为620nm,呈橙红色荧光。与FITC的黄绿色荧光对比鲜明,可配合用于双重标记或对比染色。其异硫氰基可与蛋白质结合,但荧光效率较低。

    A+

除注明外,本站内容由 细菌之家 原创或整理,转载请注明出处及链接。

本文永久链接: http://www.bacteria.cn/html/2014/292.html

  • 请您留言:专业水平所限,谬误之处在所难免。如您发现不正之处,请在下面留言,谢谢!

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen:

图片 表情