免疫组化显色相关常见问题原因分析

1、显色过深原因

(1)一抗浓度过高或孵育时间过长,建议降低一抗浓度或减少孵育时间。

(2)孵育温度过高,建议室温或4℃孵育。

(3)HRP标记二抗孵育时间过长,建议缩短时间。

2、非特异性显色原因

(1)石蜡切片脱蜡不彻底,建议延长脱蜡时间。

(2)操作过程中冲洗不充分,建议增加冲洗的次数与冲洗时间。

(3)组织富含内源性的生物素与过氧化物酶,建议使用相关试剂进行封闭。

(4)发生抗原异位。

(5)蛋白封闭不充分,建议增加蛋白封闭时间。

3、显色强度弱的原因

(1)一抗浓度过低或孵育时间过短,建议增加一抗浓度或延长孵育时间。

(2)试剂超过保质期,建议实验前确认试剂的保质期。

(3)操作过程冲洗过度,建议适度冲洗。

4、无染色的原因

(1)组织中无目的抗原的表达。

(2)一抗种属来源与二抗不匹配,建议实验前确认一抗的种属来源。

(3)显色物质与HRP系统不匹配,建议实验前确认显色体系。

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