免疫组化中不同方法的原理及二抗的选择

免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)是利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的标记技术,通过化学反应使标记抗体显色,对组织细胞内的特异性抗原进行定位、定性、定量检测的一门技术。免疫组化具有操作简单,特异性强,敏感性高,定位准确,形态与功能相结合等特点。

1、SABC法

SABC法是利用链酶亲和素(Streptavidin)与生物素(Biotin)特有的高度亲和力这一生物学性质,先将生物素与辣根过氧化物酶(HRP)结合,形成生物素化HRP,然后与链酶亲和素按一定比例混合,形成SABC复合物。用生物素化二抗与第一抗体结合,再与SABC复合物联结形成抗原-抗体-生物素化二抗-SABC复合物。最后用底物显色剂显色。

特点:该法具有灵敏度高以及低背景染色等特点。

2. SP法

根据生物素(Biotin) 与链霉亲和素(Streptavidin)具有强结合力的原理设计。在一抗(兔源与鼠源)与相应的靶抗原结合后,生物素化标记的抗多价二抗与一抗特异结合;二抗上标记的生物素与标记了辣根过氧化物酶(HRP)的链霉亲和素结合,形成抗原-特异性一抗-生物素化的二抗-HRP-标记的链霉亲和素复合物。

特点:该法孵育时间短(通常为10min)、灵敏度高以及低背景染色等特点。

3. Polymer酶标二抗法

该法采用一段多聚氨基酸聚合物作为载体链,将该多聚物与二抗结合,然后再标记上多个HRP/AP酶分子,所以同样具有很高的信号放大作用。

特点:灵敏度高、操作步骤简单、无需进行内源性的生物素封闭。

4. 直接酶标二抗法

该法是将HRP/AP酶分子直接标记于二抗上。因此需要普通的酶标二抗即可完成。实验简单,成本低,但是因为没有信号放大作用,所以敏感性不高,对很多表达丰度不是很高的抗原就可能检测不到。

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