免疫组化和免疫荧光的区别与各自特点

摘 要:

免疫组化指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。免疫荧光是利用抗原抗体特异性结合原理及荧光素标记技术,通过观察荧光变化而进行分析的技术。这两种方法在实验原理、标本制作、实验方法、标本保存、实验条件和抗体选择方面都各不相同。

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免疫组织化学:简称免疫组化,又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜的现像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质,并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫组化具有操作简单,特异性强,敏感性高,定位准确,形态与功能相结合等特点。

免疫荧光:利用抗原与抗体的特异性结合原理及特殊的荧光素标记技术,通过激光激发使荧光素发出荧光,在荧光显微镜下观察荧光的变化从而对细胞内的抗原进行分析的技术。用免疫荧光显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞(或组织)技术。免疫荧光具有特异性强、敏感性高、速度快等特点。

免疫组化和免疫荧光在定性和定位上很有优势,但在定量的效果上不是很理想。

免疫组织化学和免疫荧光的区别与各自优劣:

(1)实验原理:免疫组化是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行测定的技术。而免疫荧光是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针,检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗体),形成的抗原抗体复合物上带有荧光素,在荧光显微镜下直接观察;

(2)标本制作:免疫荧光一般用冰冻切片,最好用新鲜组织,应避免反复冻融组织,否则抗原弥散和祖先细胞结构破坏;而酶免疫组化用石蜡切片或冰冻切片均可以。但国外有的些实验室也用石蜡切片做免疫荧光,前提是有高质量的一抗和荧光素标记的二抗等优良条件。

(3)实验方法:免疫荧光染色步骤简单,而免疫组化方法较为复杂,多了DAB显色过程和抗原修复、脱蜡过程等。

(4)染色后的标本保存:免疫荧光染色后的标本一般短时间内有效,时间长了荧光可能衰退;而酶免疫组化染色标本可以长期保存。

(5)实验条件:免疫荧光要求较高,需要有荧光显微镜,激光共聚焦显微镜更好;而酶免疫组化要求较低,只需普通光学显微镜即可。

(6)实验靶标:如果是细胞膜蛋白,建议用冰冻切片做免疫荧光分析,前提是组织新鲜取材,否则抗原弥散严重;如果是细胞浆或细胞核蛋白,可以用石蜡切片的免疫组化方法。

(7)石蜡切片的优势在于组织细胞结构保存完整,但对抗原的损伤较大,尤其醛基对抗原决定族的封闭作用;而冰冻切片对抗原的保真较好,但反复冻融的组织切片,组织细胞形态结构不完好,进而影响定位。

(8)实验用抗体的选择要求:单克隆抗体特异性好,但灵敏度差;而多克隆抗体灵敏度好,但特异性稍差。

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