利用高渗透压提高细菌的电转化效率

摘 要:

电转化过程中,随着电场强度的增加,产生的疏水小孔越多,细胞膜通透性越好,外源DNA越容易进入细胞,但细胞的死亡率也会随着电场强度的增加而增加。在电转化过程中,若加入高渗溶液,由于能有效保护细胞从而提高细胞的存活率,最终提高电转化率。

关键词: ,

电穿孔法是一种快速、简单而又有效的转化方法。电转化过程中,随着电场强度的增加,产生的疏水小孔越多,细胞膜通透性越好,外源DNA越容易进入细胞,但细胞的死亡率也会随着电场强度的增加而增加。所以要得到最高的电转化率,一方面要提高电场强度到一个合适数值,另一方面又要尽量降低死亡率。细胞在电击后很容易死亡,若加入高渗溶液,由于能有效保护细胞从而提高细胞的存活率,最终提高电转化率。

Suga等[1]的研究表明,将裂殖酵母(fission yeast)细胞与高渗溶液提前进行孵育,可提高电转化效率。将酵母与2.0 M山梨糖和1.5 M NaCl溶液在30℃孵育60min再进行电转化,转化效率可以提高5倍。

江南大学徐敏等[2]研究了在电转化过程中,高渗溶液如山梨醇、甘露醇、甘油、蔗糖和葡萄糖对电转化率的影响。结果表明,高渗溶液能够有效保护细胞,提高转化率。在复苏培养基中,0.7 mol/ L甘露醇对地衣芽孢杆菌0204的保护效果最好,0.1 mol/ L蔗糖对大肠杆菌JM109的保护效果最好。由此得到质粒DNA对地衣芽孢杆菌0204的最高电转化率为9.8×10^2转化子/μg,质粒DNA对大肠杆菌JM109的最高电转化率为5.9×10^8转化子/μg。

参考文献:

[1] Suga M, Kusanagi I, Hatakeyama T. High osmotic stress improves electro-transformation efficiency of fission yeast. FEMS Microbiol Lett. 2003,225(2):235-239.

[2] 徐敏, 马骏双, 王正祥. 高渗透压细菌电转化率的影响. 无锡轻工大学学报, 2004,23(4):98-100.

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