手足口病肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)疫苗研究进展

目前我国引起手足口病(HFMD)的肠道病毒病原体主要为EV71和CVA16型病毒。研究表明,2岁以上儿童中EV71病毒是引起HFMD的主要病原体,感染人群中EV71抗体阳性率达50%以上,因此研制同时预防EV71感染的双价疫苗是十分必要的。

当前EV71疫苗的研究热点主要有两大类,一类是蛋白疫苗,一类是核酸疫苗。其中蛋白疫苗包括福尔马林灭活疫苗和针对VP1的亚单位疫苗以及VLPs疫苗。

Chun等将EV71 VP1基因与α-酪蛋白信号肽序列融合来表达VP1蛋白,运用转基因小鼠来产生并从乳汁中分泌高水平的EV71 VP1衣壳蛋白,而该蛋白能调控α-乳清蛋白的启动因子和α-酪蛋白领头链序列而产生抗病毒作用,接收了转基因乳汁的小鼠也因刺激可以产生中和抗体,并且当进行EV71攻毒实验时,其致死率也低于未接收转基因含EV71 VP1衣壳蛋白的乳汁乳汁的小鼠,这为口服疫苗的研究提供了新的思路。Lin等研究发现EV71 VLPs免疫小鼠后产生的抗体能够中和同株和异株EV71病毒,表明VLPs对EV71病毒具有交叉保护作用。

Chung等利用杆状病毒表达系统,将表达载体转至杆状病毒基因组内并重组进入基因组后,用这种重组杆状病毒感染昆虫细胞SF9,在SF9胞内共表达EV71P1和3CD蛋白,并且在被感染的SF9细胞内产生与真实病毒空间结构相似的病毒样颗粒。并且对EV71 VLPs的免疫原性进行了初步评价,用纯化后的VLPs免疫小鼠,结果表明VLPs免疫同时诱导了机体产生了体液免疫和细胞免疫应答。当用致死剂量的EV71病毒对VLPs免疫母鼠所生的乳鼠进行攻击时,发现89%的乳鼠获得保护,其保护效力优于热灭活处理的EV71病毒。有研究表明,接种EV71 VLPs致BALB/c小鼠,小鼠脾细胞增殖并产生高水平的γ-干扰素以及白介素-2和白介素-4;并且小鼠子代在感染病毒性心肌炎时,子代的病症以及器官损害程度较非接种小鼠子代轻。VLPs具有与病毒颗粒最为相似的衣壳蛋白与空间结构,因此会成为预防EV71感染极具潜力的候选疫苗。

DNA疫苗的原理是直接将带有目的抗原基因的表达质粒导入动物体内,通过在体内表达目的抗原而引起特异性免疫反应。研究表明,将EV71 VP1基因克隆到真核表达载体pVAXI中,构建了EV71 VP1重组质粒,构建的重组质粒可以在Vero细胞中成功表达VPl蛋白。用该重组质粒免疫小鼠可诱生抗VP1抗体,加强免疫1次后其中和抗体水平显著升高,并且其中和抗体对EV71病毒有中和活性。有报道利用具有信号肽序列的巨噬细胞来源的趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)基因和EV71 VP1基因构建了靶向DNA疫苗,其可以利用MDC的信号肽将VP1引导到细胞外,并且可利用其与抗原提呈细胞antigen presenting cell,APC)上MDC受体结合将VP1提呈给APC,从而有可能使疫苗的免疫效果明显提高;用VP1与三拷贝补体3片段(C3d)融合的真核表达质粒免疫小鼠,能够提高中和抗体滴度和特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic t lymphocyte,CTL)杀伤活性,其免疫效果优于单纯VP1疫苗,但要广泛运用于临床还有待于进一步探索。DNA疫苗具有易于构建和改造、易于制成多价疫苗、成本低廉、安全性高等优点,是发展EV71疫苗的一个方向。

目前,我国正在加紧对EV71灭活疫苗的研制工作。已经有三家企业的疫苗产品已经进入了Ⅲ期临床。2013年3月,多家自主研发的EV71疫苗Ⅲ期临床实验在京揭盲。Ⅲ期临床研究采取多中心、随机、双盲、安慰剂对照的方式,评价了EV71疫苗对于我国6至35月龄健康婴幼儿的保护效力、免疫原性、免疫持久性和安全性。EV71疫苗Ⅲ期临床研究达到了它的首要和次要目标。研究结果表明疫苗不仅安全,而且对受试儿童具有显著的保护效果。

    日期:2014年02月28日  分类:其 它
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