培养细胞用血清是否需要热灭活

培养细胞时,传统的观点认为血清中的补体等会影响细胞生长,所以要灭活。但事实上,培养细胞时用的血清真的必须进行热灭活吗。其实不然,新的观点认为,只有对补体敏感的细胞才需要热灭活血清。

激活的补体参具有溶细胞活性,刺激平滑肌的收缩,细肥大胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化,增强吞噬作用。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

实验显示,对大多数的细胞培养而言,所用的血清是不需要热灭活的。经此热灭活的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,从而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

如果必须做血清的热灭活,应遵循56℃、30分钟的原则,热灭活过程中随时摇晃均匀。温度过高、时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

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