包涵体蛋白重折叠复性液TGE

摘 要:

TGE是一种非常好的包涵体蛋白重折叠复性液,甚至被称为蛋白复性的“万金油”。有一次Burgess做实验时不小心出了错,把纯化出来的蛋白与glycerol 混合。结果发现蛋白变得非常稳定。此外,如果要保存的蛋白有二硫键,加一点DTT,防止蛋白形成非天然的二硫键, 也会对蛋白质的稳定有好处。

关键词: ,

TGE是一种非常好的包涵体蛋白重折叠复性液,甚至被称为蛋白复性的“万金油”。据说是由Burgess教授发明。有一次Burgess做实验时不小心出了错,把纯化出来的RNA polymerase和glycerol 混合了。结果意外发现,RNA polymerase 变得非常稳定。另外Burgess也提到,如果要保存的蛋白有二硫键,加一点DTT,防止蛋白形成非天然的二硫键, 也会对蛋白质的稳定有好处。

TGE配法如下:

50mM Tris

0.5mM EDTA

50mM Nacl

5%或10%甘油

1%的甘氨酸或精氨酸和谷胱甘肽(可选)。

调节pH值为7.9-8.0,也可根据目的蛋白的等电点来确定pH值,别离等电点太近,否则会出现大量沉淀,甚至目的蛋白全部沉掉。

关于TGE的问与答:

1、用TGE透析复性尿素纯化蛋白的具体方法?

直接将待透析样品装入处理过的透析袋中,放入500ml TGE中,放入4℃箱透析即可。每隔8h换一次透析液,总透析时间从24-48小时不等。

2、在透析液中加入的谷胱甘肽的浓度为多少?

氧化型:0.05mM 还原型:0.5mM。

3、TGE透析前蛋白的最大浓度范围?

最好不要超过3000ug/ml。

4、8M尿素纯化后的蛋白可以直接用使用不含尿素的TGE透析复性吗?

可以

5、透析前对蛋白的浓度要求是?

不要太大,透析前最好先用TGE稀释一倍后再行透析。

    A+

除注明外,本站内容由 细菌之家 原创或整理,转载请注明出处及链接。

本文永久链接: http://www.bacteria.cn/html/2014/139.html

  • 请您留言:专业水平所限,谬误之处在所难免。如您发现不正之处,请在下面留言,谢谢!

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen:

图片 表情