冻干保藏菌种的复苏方法

菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，其重要性不言而喻，因此在复苏一些冻干保藏的菌种时应先了解一些相关知识。冻干的细菌可以保存很长时间，通常情况下复苏不会有太大问题，我曾经复苏了一支30多年前冻干保存的菌株。但是对一些比较珍贵、比较难以获取的菌种，在复苏时也要注意，严格按照步骤进行操作。

每种菌的复苏方法可能会不太一样，尤其是对于一些难以培养的细菌复苏会困难一些，下面是一个通用的冻干保藏菌种的复苏方法。

1、查询了解冻干菌种的相关信息，如菌株名称、最适培养基、最适培养条件、是否有致病性等。如果从ATCC等菌株保藏单位购买的菌株，一般能会都会提供这些信息。如果是个人保存的菌种，最好与保存人联系获取信息。如果实在没有，只能从文献和网络是查找了。

2、准备相关培养基（包括液体培养基和平板）和培养条件，并准备70%酒精棉、接种环、摄子、酒精灯等试剂和器材，将这些试剂和器材移入接种室或净化台。

3、观察冻干瓶上是否有标记，如有标记，刚详细记录，其中可能包括有菌株编号、冻干日期等信息。

4、用70%酒精棉对冻干瓶表面进行消毒，待干后，打开冻干瓶。

5、用移液器吸取适量（通常约为300-500μl）的无菌生理盐水或培养液溶解冻干菌块。

6、用接种环挑取溶解后的菌液，在平板培养基上划线，并挑取菌液接种到液体培养基（需要多划几个平板，多接内管菌。我通常是做3-5个）。

7、如果菌种冻存时间太久远，存活细菌太少。可以取少量菌液（如100μl）用培养基10倍梯度稀释后，每个梯度取100μl涂平板并接种液体培养基。

8、标记并做好记录，将接种后的平板和液体培养基在适宜的条件下进行培养。