冻干保藏菌种的复苏方法

摘 要:

冻干的细菌可以保存很长时间,通常情况下复苏不会有太大问题。但是对一些比较珍贵、比较难以获取的菌种,在复苏时也要注意,严格按照步骤进行操作。主要步骤包括查询了解冻干菌种的相关信息、准备相关培养基(包括液体培养基和平板)和培养条件、溶解、接种、培养等。

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菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料,其重要性不言而喻,因此在复苏一些冻干保藏的菌种时应先了解一些相关知识。冻干的细菌可以保存很长时间,通常情况下复苏不会有太大问题,我曾经复苏了一支30多年前冻干保存的菌株。但是对一些比较珍贵、比较难以获取的菌种,在复苏时也要注意,严格按照步骤进行操作。

每种菌的复苏方法可能会不太一样,尤其是对于一些难以培养的细菌复苏会困难一些,下面是一个通用的冻干保藏菌种的复苏方法。

1、查询了解冻干菌种的相关信息,如菌株名称、最适培养基、最适培养条件、是否有致病性等。如果从ATCC等菌株保藏单位购买的菌株,一般能会都会提供这些信息。如果是个人保存的菌种,最好与保存人联系获取信息。如果实在没有,只能从文献和网络是查找了。

2、准备相关培养基(包括液体培养基和平板)和培养条件,并准备70%酒精棉、接种环、摄子、酒精灯等试剂和器材,将这些试剂和器材移入接种室或净化台。

3、观察冻干瓶上是否有标记,如有标记,刚详细记录,其中可能包括有菌株编号、冻干日期等信息。

4、用70%酒精棉对冻干瓶表面进行消毒,待干后,打开冻干瓶。

5、用移液器吸取适量(通常约为300-500μl)的无菌生理盐水或培养液溶解冻干菌块。

6、用接种环挑取溶解后的菌液,在平板培养基上划线,并挑取菌液接种到液体培养基(需要多划几个平板,多接内管菌。我通常是做3-5个)。

7、如果菌种冻存时间太久远,存活细菌太少。可以取少量菌液(如100μl)用培养基10倍梯度稀释后,每个梯度取100μl涂平板并接种液体培养基。

8、标记并做好记录,将接种后的平板和液体培养基在适宜的条件下进行培养。

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